表达HSA/IL2的重组CHO细胞的无血清培养基优化研究

缪亚娜， 熊文典， 万爱妮， 张晶晶， 蔡燕飞， 陈 蕴， 金 坚*

(1.江南大学 药学院，江苏 无锡214122；2.江南大学 生物工程学院，江苏 无锡214122）

白介素是一种由人白细胞分泌的调节细胞生长和分化的细胞因子[1]。近20年，IL2在治疗肿瘤、黑色素瘤、肾炎[2]、肝炎以及免疫缺陷性疾病[3]中取得显著效果。但由于IL2相对分子质量小，体内半衰期短[4]以及具有一定的免疫源性甚至会引起过敏反应等因素，IL2的药物利用率低，患者需频繁注射，限制了IL2的应用。HSA融合技术实现了各种人源药物蛋白质分子与HSA蛋白质的融合表达[5-6]。雷建勇等[7]构建pPIC9K-HAS/IL2质粒，并电转入毕赤酵母，纯化得到HAS/IL2融合蛋白不仅蛋白活性好，而且有效延长蛋白质半衰期至12.34 h。后期研究中发现，毕赤酵母表达HSA融合蛋白时存在蛋白质降解、产物不均一和过度糖基化等现象，这些不利因素限制了毕赤酵母表达IL-2融合蛋白的应用。中国仓鼠卵巢细胞 （Chinese hamster ovary cells，CHO Cells）不仅具有重组基因高效表达能力，而且可精确转录翻译、折叠蛋白质，并能保证蛋白质的充分糖基化[8]，成为重组糖基化蛋白生产的首选体系。卢慧惠等[9]构建pMH3-HAS-IL2质粒，并电转入CHO细胞，筛选出表达HSA/IL2的CHO细胞株，经摇瓶流加培养及纯化获得活性较好的HSA/IL2融合蛋白，解决了融合蛋白的降解和糖基化等问题。但CHO细胞培养仍有问题急需解决，如细胞生长密度低（最高生长密度仅为6.0×106cells/mL）、HSA/IL2表达量低（仅为53 mg/L）等。

悬浮培养是哺乳动物细胞大规模培养研究和应用的重要模式和首要选择[10]。传统的培养基通常按一定比例加入血清或者组织提取物，然而细胞只能在无血清或含血清替代物的培养基中才能实现悬浮状态。……