PI3K/Akt信号通路对肺泡上皮钠通道α亚基表达的影响*

邓 旺，李长毅，王导新

(重庆医科大学附属第二医院呼吸内科 400010)

肺泡上皮钠通道(epithelial sodium channel，ENaC)表达于Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞，由α、β和γ 3个亚基组成。目前研究认为清除肺泡腔内水肿液的主要机制是通过ENaC完成钠离子从顶膜到基底膜侧主动转运过程[1]。有效清除肺泡腔内过多的水肿液，维持肺泡腔相对干燥，是治疗急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)和决定其预后的关键[2]。研究显示，α-ENaC基因敲除的小鼠因不能有效清除肺水肿液于出生后40 h死亡，因此α-ENaC可能是影响肺水肿液清除的主要亚基[3]。磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导是一条能减轻ARDS肺水肿的保护性通路[4]。但PI3K/Akt 信号通路参与肺水肿液清除的机制是否通过调控α-ENaC的表达来实现目前尚不清楚。本研究通过体外培养A549细胞(肺上皮细胞)，探讨PI3K/Akt信号通路调控α-ENaC表达的作用。

1 材料与方法

1.1材料 肺上皮细胞A549及培养基RPMI1640购自重庆医科大学生命科学院。重组人胰岛素购自美国礼来公司。LY294002购自美国Sigma公司。总RNA提取试剂盒和反转录PCR(RT-PCR)试剂盒购自大连宝生物工程有限公司。α-ENaC及β-actin购自英国Abcam公司。Akt及磷酸化Akt(p-Akt)抗体购自美国Cell Signaling Technology公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养及分组 A549细胞培养于RPMI1640培养基中(含10%小牛血清)，然后放入37 ℃ 5% CO2培养箱中培养。胰蛋白酶消化传代，细胞贴壁100%开始干预。实验分组：对照组细胞在不含10%小牛血清的培养基培养；胰岛素组细胞在不含10%小牛血清的培养基中分别给予胰岛素2、20、200 mU/L培养120 min，另加入胰岛素200 mU/L培养30、60、120 min；LY294002组细胞在不含10%小牛血清的培养基中加入胰岛素200 mU/L和LY294002 10 μmol/L(抑制PI3K/Akt通路[5])培养2 h。……