复方罗汉果含片对实验鼠清咽功能的影响

王莹，高卓林，白丽婷，杨丽泉

（吉林大学药学院，长春 130021）

咽炎主要由溶血性链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌等病原菌感染引起，临床多以咽部干燥感、灼热感、咽痛等为主要表现症状，易引发喉炎、肺炎、中耳炎等疾病，严重者可引起急性肾炎、败血症等并发症[1,2]。调查显示，我国耳鼻喉科门诊日常就诊患者中咽炎患者的比例接近1/3[3]。

复方罗汉果含片是由罗汉果、金银花、牛蒡子、乌梅、胖大海5 味传统中药为主制成的中药复方制剂，主要有效成分为金银花中的绿原酸、异绿原酸，罗汉果中的VC、甜甙以及牛蒡子中的牛蒡子苷和牛蒡子苷元[4]。这些成份均具有清热解毒、清咽利喉的作用[5,6]，抗炎机制可能与抑制滑膜细胞炎性增殖或者有效成分能够有效抑制致病菌有关[7]。本研究主要通过动物实验来探究复方罗汉果含片清咽作用，以期开发相关保健食品。

1 实验材料

1.1 受试样品

复方罗汉果含片，规格：0.75 g/片，批号：20180519，成人推荐用量为6.0 g（每日2 次，每次4片），由吉林大学药学院药物制剂实验室提供。成人体重按60 kg 计算，折合剂量0.10 g/kg。受试样品避光、密封保存于阴凉干燥处，保质期24 个月。

1.2 实验动物与饲养

雄性SD 大鼠（SPF 级，实验动物质量合格证号：43004700050381、43004700050382，体重 176.2～200.2g，平均体重185.4 g）、雄性ICR小鼠（实验动物质量合格证号：43004700050049，体重 19.1 g～23.6 g，平均体重21.6 g）〔实验动物生产许可证号：SCXK（湘）2016-0002，湖南斯莱克景达实验动物有限公司〕；鼠饲料〔饲料生产许可证号：SYXK（京）2014-0010，北京科澳协力饲料有限公司〕。

实验动物饲养于湖南省实验动物中心（湖南省药物安全评价研究中心），环境：SPF 级屏障；光照：12 h明暗交替；实验室温度：20.0～26.0 ℃；相对湿度范围40%～70%。实验动物使用许可证号：SYXK（湘）2015-0016。饮用纯化水，群笼饲养（每笼5 只），自由摄食摄水。

1.3 仪器与试剂

PL2002 型电子天平、MS105DU 型分析天平、PL203 型电子天平〔梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司〕；CP413 型分析天平〔（奥豪斯仪器（常州）有限公司〕；YLS-7B 型足趾容积测量仪（济南益延科技发展有限公司）；LDZM-80KCS型立式压力蒸汽灭菌锅（上海申安仪器有限公司）；GFL-125 型电热鼓风干燥箱（天津莱玻特瑞仪器设备有限公司）。

戊巴比妥钠（批号：20160218，德国默克公司）；角叉菜胶（y-Carrageenan，批号：BCBP8978V，Sigma 公司）；注射用生理盐水（批号：18012001D，湖南康源制药有限公司）；二甲苯（批号：20150930，国药集团化学试剂有限公司）。

2 方法

2.1 分组及给样

2.1.1 棉球植入实验 SD 雄性大鼠适应性喂养5 d，选取合格的大鼠40 只。按体重随机分为4 组，即阴性对照组及受试样品低、中、高剂量组，每组10 只。受试样品低、中、高剂量分别为0.50 g/kg、1.00 g/kg 和3.00 g/kg，分别相当于成人推荐食用量的5、10 和30倍。各组小鼠按10 mL/kg 灌胃给予相应量的受试样品，阴性对照组大鼠灌胃给予等体积纯化水，每日1次，连续给样30 d。给样期间，每周称重1 次，并根据体重调整给样量。

2.1.2 足趾肿胀试验 分组及给样同“2.1.1”项下棉球植入实验。

2.1.3 小鼠耳肿胀实验 ICR 雄性小鼠适应性喂养3 d，选用合格小鼠40 只，分组及给样同“2.1.1”项下棉球植入实验。

2.2 大鼠棉球植入实验

在受试给样22 d 后，将紧致小棉球（灭菌干燥至恒重，约22～24 mg）植入戊巴比妥钠麻醉大鼠的两侧腹股沟，缝合切口。末次给予受试样品1 h 后处死大鼠，剥离并取出棉球肉芽组织，恒温干燥箱60 ℃干燥1 h后称重，计算肉芽肿净量（肉芽肿净量=干燥后棉球肉芽肿重量-原棉球重量）。

2.3 大鼠足趾肿胀实验

末次给予受试样品1 h后，大鼠右后足趾注射1%致炎剂角叉菜胶溶液（0.1 mL/只），测量各组大鼠注入致炎剂前、后1、2、4、6 h 的足趾容积，同一部位测量3次，取平均值。以注入致炎剂后不同时间与注入致炎剂前足趾容积之差为肿胀值，计算足趾肿胀率。肿胀率＝肿胀值/致炎前足趾容积×100%。

2.4 小鼠耳肿胀实验

末次给予受试样品1 h 后，吸取二甲苯20uL 滴加在小鼠右耳外侧面耳廓中央，让其自由扩散，30 min后颈椎脱臼处死小鼠，剪下双耳，在两耳相同部位打下耳片并称重，以2耳片重量之差为耳廓肿胀值，计算耳廓肿胀率。耳廓肿胀率=耳廓肿胀值/对照耳片重量×100%。

2.5 实验数据统计方法

采用SPSS16.0 进行统计分析，统计学意义水平设定为P＜0.05 表示显著性差异，P＜0.01 表示极显著性差异，均证明了该数据具有统计学意义。

3 实验结果

3.1 对实验动物一般状态和体重的影响

所有动物鼠体重呈正常增长，精神状态、行为活动、摄食摄水、粪便、尿液以及各腔道分泌物等均未见明显异常。受试样品各剂量组动物体重与阴性对照组比较差异无显著性（P＞0.05）。

3.2 对大鼠棉球植入实验的影响

与阴性对照组相比，受试样品各剂量组大鼠干燥后棉球肉芽肿重量、肉芽肿净量均呈剂量依赖性减少，其中高剂量组差异具有显著性（P＜0.01），见表1。

表1 对大鼠肉芽肿净量的影响Table 1 The effect on the net amount of granuloma in rats （±s，n=10）

表1 对大鼠肉芽肿净量的影响Table 1 The effect on the net amount of granuloma in rats （±s，n=10）

注：与阴性对照组比较，**P＜0.01。Note:Compared with positive control group,**P＜0.01

肉芽肿净量（mg）Granuloma weight对照组 Negative group -- 23.4±0.4 187.7±18.4 164.3±18.3组别Groups剂量（g/kg）Dosage原棉球重量（mg）Raw cotton ball weight干燥后棉球肉芽肿重量（mg）Cotton ball granuloma weight after drying低剂量组 Low dose group 0.50 23.0±0.4 186.6±33.6 163.6±33.7中剂量组 Middle dose group 1.00 23.4±0.6 162.0±34.6 138.6±34.2高剂量组 High dose group 3.00 23.5±0.2 149.3±30.2** 125.8±30.1**

3.3 对大鼠足趾肿胀实验的影响

与阴性对照组比较，受试样品各剂量组大鼠注射致炎剂后不同检测时间均可见足趾容积降低，且各剂量组部分时间差异具有显著性（P＜0.05或P＜0.01），见表2。

表2 对大鼠足趾容积的影响Table 2 The effect on rat toe volume （±s，n=10）

表2 对大鼠足趾容积的影响Table 2 The effect on rat toe volume （±s，n=10）

注：与阴性对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。下表同。Note:Compared with positive control group,*P＜0.05,**P＜0.01.The below table same.

致炎前 Before inflammation 1 h 2 h 4 h 6 h对照组 Negative group 1.860±0.117 2.289±0.156 2.486±0.082 2.754±0.129 2.898±0.167低剂量组 Low dose group 1.823±0.126 2.147±0.231 2.307±0.168 2.552±0.193 2.694±0.203*中剂量组 Middle dose group 1.803±0.112 2.070±0.144* 2.244±0.184** 2.412±0.299 2.579±0.296**高剂量组 High dose group 1.762±0.131 2.005±0.136** 2.170±0.168** 2.291±0.195** 2.297±0.213**组别Groups足趾容积（mL）Toe volume

3.4 对小鼠耳肿胀实验的影响

与阴性对照组比较，受试样品各剂量组小鼠右耳片重、耳肿胀度及耳廓肿胀率均降低，且差异具有显著性（P＜0.05 或 P＜0.01），见表3。

表3 对小鼠耳廓肿胀率的影响Table 3 The effect on the swelling rate of mouse ears （±s，n=10）

表3 对小鼠耳廓肿胀率的影响Table 3 The effect on the swelling rate of mouse ears （±s，n=10）

组别 Groups 剂量（g/kg）Dosage左耳片重（g）Left ear weigh右耳片重（g）Right ear weight耳肿胀度（g）Ear swelling degree耳廓肿胀率（%）Swelling rate of mouse ears对照组 Negative group -- 0.016 3±0.001 4 0.027 4±0.004 4 0.011 2±0.003 3 68.0±16.3低剂量组 Low dose group 1.00 0.015 7±0.001 4 0.023 1±0.003 5* 0.007 5±0.002 9 47.7±18.3*中剂量组 Middle dose group 2.00 0.016 3±0.000 9 0.022 2±0.004 0* 0.005 9±0.004 1** 36.2±25.3**高剂量组 High dose group 3.00 0.017 2±0.002 1 0.022 3±0.006 0* 0.005 1±0.004 2** 28.4±18.9*

4 结论

在本实验条件中，SPF 级 SD 大鼠、ICR 小鼠均按0.50 g/kg、1.00 g/kg 和 3.00 g/kg 剂量（分别相当于成人推荐食用量的5、10 和30 倍）经口灌胃给予复方罗汉果含片30 d。结果表明，在大鼠棉球植入实验中，与阴性对照组相比，受试物高剂量组差异具有显著性（P＜0.01）；大鼠足趾肿胀实验中，与阴性对照组比较，受试样品各剂量组部分时间差异具有显著性（P＜0.05 或P＜0.01）；在小鼠耳肿胀实验中，与阴性对照组比较，受试样品各剂量组差异具有显著性（P＜0.05 或P＜0.01)。以上结果充分证明了该复方罗汉果含片具有清咽利喉的药理学功效。

目前，西医对咽炎的治疗大多采用抗生素类药物、抗病毒等药物辅以激素类制剂，这些方法存在易复发、耐受性差、药物毒副作用大等系列问题。运用中药治疗急、慢性咽炎，具有毒副作用小、疗效明显，标本兼治等特点[8]，该复方含片对开发相关利咽保健食品具有较大的借鉴意义。