circRNAs作为胃癌诊断标记物可行性的meta分析*

潘志宏，程鎏，闻立伟，曲韬，杜志娜

200041 上海，上海市静安区江宁路街道社区卫生服务中心 外科(潘志宏、程鎏、闻立伟)；200126 上海，上海市浦东新区杨思医院 消化科(曲韬、杜志娜)

作为全球第5大常见癌症及第3大癌性相关死亡原因，胃癌严重影响着人们的健康[1]。2015年统计结果显示，新发浸润型恶性肿瘤中胃癌仅次于肺癌，约67.9万例[2]。早期胃癌的10年生存率可高达90%，而晚期胃癌的5年生存率低于30%，这意味着早期诊断有助于提升胃癌患者的总体预后[3]。目前，胃癌的早期诊断和预防主要依赖于胃镜下组织活检[4]，过程复杂且病人感受痛苦，在临床应用上受到很大局限[5]。目前较为常用的胃癌早期诊断的肿瘤指标包括CEA、CA199及CA125,但其对胃癌的诊断灵敏度和特异度均较低，在胃癌早期诊断方面应用价值有限，因而，进一步深入研究新型胃癌特异性生物标记物具有重要的意义[6]。

近几年随着测序技术的进步，环状RNA(circular RNAs,circRNAs)在肿瘤发生发展中的作用逐渐受到越来越广泛的关注。circRNAs是一种首先在RNA病毒中鉴定的非编码RNA，是通过将3′和5′末端共价键连接而产生[7-8]。近几年测序技术发展，使得circRNAs成为研究热点[9]。circRNAs发挥生物学作用方式多样：(1)吸附miRNA；(2)吸附蛋白；(3)调节转录；(4)选择性剪接；(5)调节细胞周期；(6)调节亲本基因翻译等[10-11]。有研究提示，在肿瘤组织中存在circRNAs的异常表达，并在肿瘤细胞生长、凋亡、侵袭、转移、耐药方面发挥着重要作用。circRNAs具有独特的分子结构和多样的生物学性能，circRNAs表达稳定，不易被降解，其较长的半衰期有利于circRNAs在人体内的富集，检测结果更加真实准确，这也为利用circRNAs作为诊断标记物带来优势。Wang等[12]对circRNAs在肝癌中诊断敏感性和特异性进行meta分析，结果提示circRNAs在肝癌诊断方面具有潜在应用价值。许多研究表明，circRNAs在胃癌组织及癌旁组织中存在表达差异，与肿瘤的TNM分期具有相关性，在胃癌的发生发展中发挥着一定的作用。但是，目前尚没有circRNAs作为胃癌诊断标记物的meta分析。本文旨在对circRNAs表达差异与胃癌诊断准确性的关系进行meta分析，评估circRNAs作为胃癌诊断标记物的临床价值，为胃癌的诊断提供有力参考。

1 材料与方法

1.1 文献检索

1.1.1 外文数据库 包括PubMed，Web of Science等数据库，中文数据库包括万方、中国知网等数据库。

1.1.2 检索关键词 中文检索词为“环状RNAs”、“胃癌”，英文检索词为“circular RNAs”、“gastric cancer”。

1.1.3 检索年限 2015年1月至2018年11月的中英文文献。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准 ①研究分析circRNAs表达与胃癌的关系；②从原始数据中提取到circRNAs表达差异对胃癌诊断准确性的灵敏度、特异度和曲线下面积值(area under the curve,AUC)；③检测对象为胃癌组织和癌旁或正常组织中提取的circRNAs；④文献已在专业期刊发表。

1.2.2 排除标准 ①研究对象不是患者；②没有对照研究；③文献类型为综述、meta分析；④检索对象为体液中的circRNAs；⑤重复的文献。

1.3 文献筛选、资料提取及质量评价

由两名工作人员根据既定检索策略以及纳入和排除标准，筛选相关文献，提取相关数据，主要包括第一作者、发表年份、样本数量、灵敏度、特异度、AUC，计算tp、fp、fn、tn，如遇分歧讨论解决。应用QUADAS-2系统对最终纳入meta分析的文献进行质量评价。

1.4 统计学处理

1.5 应用Stata 15.0软件分析circRNAs差异性表达与胃癌诊断的关系，计算合并灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、诊断优势比，根据接受者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线计算AUC，应用Deek’s漏斗图评价发表偏倚。

2 结 果

2.1 文献检索结果

检索流程如图1所示，最终共纳入13篇文献[11,13-24]，包括1 394名患者。

2.2 纳入文献基本特征

总结13篇被纳入文献基本特征，包括第一作者、发表年份、国家、样本量、诊断指标(敏感度、特异度、AUC)、样本类型、检测方法、circRNAs表达，详细见表1。应用QUADAS-2评分系统评价文献质量。结果提示所纳入的研究具有较好的方法学质量，发生偏倚的可能性较低, 见图2。

图1 Meta分析文献检索流程图

Figure1.FlowChartofDocumentRetrievalforMeta-Analysis

表1 13篇被纳入文献基本特征

Table 1. Characteristics of 13 Included Articles

CircRNAFirst authorYearSample sizeCancer tissueControl tissueSensitivitySpecificityAUCCutoff valueHsa_circ_0000745Mei Huang201760600.8550.450.683-Hsa_circ_0000190Shijun Chen20171041040.7210.6830.756.83Hsa circ 0074362Yi Xie20171271270.8430.3620.6312.17Hsa_circ_0003159Mengqian Tian20171081080.8520.5250.7512.31Hsa_circ_0001895 Yongfu Shao201796650.6780.8570.7929.53Hsa_circ_0000520 Handong Sun201856560.5360.8570.613-CircPVRL3Handong Sun201862620.9030.5640.763-Hsa_circ_0006633 Guoliang Ye201796960.6010.8130.7418.17Hsa_circ_00001649Wenhan Li201776760.7110.8160.8340.22Hsa_circ_0000096Peifei Li20171011010.880.560.8212.9Hsa_circ_0000705Yongfu Shao20173113110.6460.6980.7199.125Hsa_circ_002059Peifei Li20151011010.810.620.7312.9Hsa_circ_0014717Yongfu Shao201796960.5940.8130.69612.14

AUC: area under the curve.

2.3 Meta分析结果

2.3.1 合并效应量 circRNAs作为胃癌诊断标记物的合并敏感度、合并特异度、合并阳性似然比、合并阴性似然比、合并诊断优势比及各自的95%可信区间分别为0.70(95%CI 0.66～0.75)、0.72(95%CI 0.68～0.75)(图3)、2.52(95%CI 2.16～2.94)、0.39(95%CI 0.31～0.49)(图4)、6.46(95%CI 5.22～7.89)(图5)，合并诊断性能AUC及95%可信区间为0.77(95%CI 0.73～0.80)(图6)。

2.3.2 纳入文献的异质性检验 如图7，13篇文献11篇位于中心区域，2篇位于区域外，提示研究间异质性较小。

2.4 发表偏倚分析

Deek’s漏斗图(图8)斜率系数P值为0.028(P<0.10)，提示发表偏倚存在的可能性极小。

图2 文献质量评价(QUADAS-2评分系统)

Figure2.LiteratureEvaluation(QUADAS-2ScoringSystem)

图3 环状RNAs作为胃癌诊断标记物的合并灵敏度及特异度的分析

Figure3.PooledSensitivityandSpecificityofCircularRNAsasDiagnosticMarkersforGastricCancer

图4 环状RNAs作为胃癌诊断标记物的合并似然比的分析

Figure4.PooledLikelihoodRatioofCircularRNAsasDiagnosticMarkersforGastricCancer

图5 环状RNAs作为胃癌诊断标记物的诊断比值比分析

Figure5.DiagnosticOddsRatioofCircularRNAsasDiagnosticMarkersforGastricCancer

图6 环状RNAs作为胃癌诊断标记物的ROC曲线

Figure6.ReceiverOperatingCharacteristicCurveofCircularRNAsasDiagnosticMarkersforGastricCancer

图7 纳入13篇文献的异质性检验

Figure7.HeterogeneityTestof13Articles

图8 纳入13篇文献的Deek’s漏斗图分析

Figure8.Deek’sFunnelPlotAsymmetryTestof13Articles

3 讨 论

近年来，胃癌的诊疗手段有了一定程度的丰富，但进展期胃癌患者的总体预后仍然较差。而胃癌早期发现是提高患者预后的重要举措。因而研究用于胃癌诊断的特异性marker，具有重要的临床应用价值[25]。

近年来的科学研究发现，circRNAs在肿瘤发生发展中也扮演着一定的角色，并且因其特有的环状结构而拥有较好的稳定性，可在人体内蓄积，具有作为肿瘤诊断标记物的价值。目前，已有几项研究探索了外周血找特定circRNAs用于胃癌诊断效能的研究，初步提示了circRNAs在胃癌诊断方面的潜在应用价值[26]。进一步的，关于circRNAs在胃癌诊断效能方面的meta分析尚未见报道。

本研究通过检索文献，并经过入、排标准筛选后，共纳入13篇研究circRNAs在胃癌诊断价值的文章。文献检索、纳入、排除和数据的提取分别由两名研究者进行，避免选择偏倚。所纳入的文献依据QUADAS-2评分系统进行质量评价，结果提示所纳入的研究具有较好的方法学质量，发生偏倚的可能性较低。纳入文献异质性分析结果提示所纳入的研究间异质性较小。发表偏倚分析结果也提示各研究间存在发表偏倚的可能性较低。

我们对这13篇文献中circRNAs作为生物标记物对胃癌诊断效率进行了分析，其合并敏感度、合并特异度、合并阳性似然比、合并阴性似然比、合并诊断优势比及各自的95%可信区间分别为0.70(95%CI: 0.66～0.75)、0.72(95%CI: 0.68～0.75)、2.52(95%CI: 2.16～2.94)、0.39(95%CI: 0.31～0.49)、6.46(95%CI: 5.22～7.89)，合并诊断效能AUC及95%可信区间为0.77(95%CI: 0.73～0.80)，结果提示circRNAs适合作为胃癌诊断性生物标记物。在入选的文献中，circRNAs Hsa_circ_00001649(AUC：0.83；敏感度：0.71；特异度：0.82)和hsa_circ_0000096(AUC：0.82；敏感度：0.88；特异度：0.56)表现出了较高的诊断效率。circRNAs可作为胃癌诊断性生物标记物，circRNAs差异表达的检测具有早期诊断胃癌的发展潜力，且无创、无放射风险，circRNAs作为胃癌预后诊断标记物的价值值得进一步研究。

然而，本研究尚有一些不足之处：(1)缺乏无病者对比数据；(2)样本量有限，需要进一步扩大样本量以增加准确性；(3)由于检测方法不同或为提高准确性，我们排除了一些实验研究。随着RNA检测技术不断成熟，不久的将来，快速、准确、廉价的circRNAs检测技术即有可能应用于胃癌的临床早期诊断。

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