自制血液分析高浓度样品进行血液分析仪检测线性范围的验证

陈静 段小勇 王晟

443002三峡大学第三临床医学院 葛洲坝集团中心医院检验科1，湖北宜昌

443002三峡大学第三临床医学院 葛洲坝集团中心医院急诊医学科2，湖北宜昌

临床检验的质量对患者的诊断、治疗和预后有直接影响。检验程序对于检验结果的质量保障有重要意义[1]。根据CNAS-CL02准则进行判定，其通过了中国合格评定国家认可委员会的评定。2012年《医学实验室质量和能力认可准则》明确指出：实验室应在设备安装和使用前验证其性能可达到标准，并符合相关检验的要求[2-3]。CNAS-CL43：2012同时指出：血液分析仪的性能验证内容至少应包括精密度、可报告范围(线性范围)、正确度等，宜参考WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》[4]。关于检测线性范围第4版《全国临床检验操作规程》这样解释，线性是指所用分析方法在给定范围内获取与样品中分析物浓度/活性成正比的试验结果的能力。检验方法的准确度是随着所测定的含量范围而发生变化的。超过一定的范围，准确度就会受到影响[5]。本研究所进行的检测线性范围的验证就是确认厂家声明检测线性范围内结果的准确度能达到行业标准的要求。

资料与方法

材料：①全自动五分类血液分析仪。②筛选合适的新鲜日常血液分析样品4份。③离心机、可调式微量移液器及一次性耗材。

图1 WBC线性结果

表1 WBC线性结果(109/L)

图2 RBC线性结果

表2 RBC线性结果(1012/L)

方法：①选取当日检测结果分别为WBC＞20× 109/L、 RBC≈4.00× 1012/L、HGB≈125 g/L、PLT＞500×109/L且HCT≤0.4的EDTA-K2抗凝静脉全血样品各1例。②将上述4例样品置于离心机内，进行3 500 r/min，离心10 min，而后尽量将其血浆吸尽，将这些样品分离成血浆和少浆血。③参照EP6-A2文件用血浆(血小板使用稀释液)作为低浓度样品(L)，少浆血作为高浓度样品(H)[6]，将低浓度和高浓度样品按比例混合，即按4∶0、3∶1、2∶2、0∶4的比例混合可得到5份线性试验样品[7]。各样品的预期浓度按以下式计算：样品预期浓度=(C1V1+C5V5)/(V1+V5)，V1代表所取1号低浓度样品体积，C1代表1号低浓度样品浓度，C5代表5号高浓度样品浓度，V5代表所取5号高浓度样品体积。根据实验样品配制的稀释关系，对各实验样品内含分析物的浓度进行计算，得出的即为样品的预期值。再经测定方法检测，获得5个检测值。按以上实验要求，重复测定每个样品3次，取平均值，它们和预期值形成5对预期值及实测平均值。采用直线回归方程统计数据，实测值为纵坐标，横坐标定位预期值，得直线回归y=ax+b(b设定为零)。若线性回归方程的斜率在(1±0.03)范围内，相关系数r≥0.975，或r2≥0.95[8]，则认为该项目在此仪器线性范围通过验证。

结 果

WBC、RBC、HGB、PLT项目的线性验证的结果均符合《WS/T 406-2012临床血液学检验常规项目分析质量要求》的要求，其线性范围验证通过。由于WBC、PLT符合厂家提供的仪器线性范围的高浓度样品非常难以获得，而经过对以往数据的统计确认此次实际验证范围已覆盖日常工作中99.9%以上的样品浓度范围，故以此次验证检测线性范围可满足日常工作需要。WBC、RBC、HGB、PLT线性结果，见图1～图4和表1～表4。

讨 论

作为检验科最常用的一种分析仪器，其检测结果的准确性直接影响了临床医师对疾病的诊断和治疗[9]。因此在使用分析仪前首先要保证该仪器的系统误差在临床可接受范围内，因此在仪器新安装和投入临床使用前，除了要求满足与检测相关的规格外，还需要达到所需的性能[10]，即进行性能验证。由于在性能的线性范围验证过程中需用到高浓度样本，而该样本较难获得，实验室的质量管理工作会因为等待临床高浓度样本而处于被动地位，影响了行业标准在实际工作的具体实施[11]，如果用离心浓缩的方式自制少浆全血作为高浓度样品，将较易获得适合浓度的高浓度样品，再将其血浆(稀释液)作为低浓度样本，即符合卫健委标准的要求，又避免了各种不相容的情况，使检测结果与预期结果有非常好的相关性，从而能够快速地完成血液分析仪的线性范围验证，缩短了验证周期，提高了工作效率，同时也使检验结果的准确性有了数据的支撑。

图3 HGB线性结果

表3 HGB线性结果(g/L)

图4 PLT线性结果

表4 PLT线性结果(109/L)

自制血液分析的少浆全血高浓度样品顺利地通过了线性范围验证，同时满足了高效与质量保证的两大要素，对血液分析仪的线性范围验证具有一定的参考意义。故在此将血液分析仪的线性范围验证方法进行总结，若有不足敬请批评指正。