ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒性能评价

习浩 刘荣静

摘要：目的  评价ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ（hs-cTnⅠ）试剂盒性能，以验证其是否符合临床实验室使用要求。方法  参考CLSI的EP15-A2文件和相关文献对ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒精密度、正确度进行评价，EP17-A文件和相关文献对空白检测限（LoB）进行评价，EP6-A文件和相关文献对线性范围进行评价，参考NCCLS C28-A2文件，对健康体检者血浆标本分男女验证生物参考区间。结果  实验测得hs-cTnⅠ高值样本（5.702 μg/L）的批内不精密度CV为1.56%，总不精密度CV为1.27%，低值样本（0.003 μg/L）的批内不精密度CV和总的不精密度CV均为0;hs-cTnI的回收率为 97.50%;LoB为0.001 μg/L;在检测范围内，hs-cTnI理论值与测定值的线性方程为Y=1.0006X-0.13136，R2=0.9999;生物参考区间验证结果显示男性100.00%的结果在厂家提供的生物参考区间范围内，女性96.67%的结果在厂家提供的生物参考区间范围内。结论  ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒性能通过验证，可为临床提供准确、可靠的hs-cTnⅠ定量检测结果，为临床对心肌损伤的诊断、治疗提供重要信息。

关键词：高敏肌钙蛋白Ⅰ;性能;精密度;正确度;生物参考区间

Abstract：Objective  To evaluate the performance of the ARCHETECT high-sensitivity cardiac troponin I （hs-cTnI） kit to verify compliance with clinical laboratory requirements.Methods  The accuracy of the ARCHETECT high-sensitivity troponin I kit were evaluated with reference to the CLSI EP15-A2 document and related literature. The blank detection limit （LoB） was evaluated in EP17-A and related literature， EP6-A and The relevant literature evaluates the linear range. Referring to the NCCLS C28-A2 document， the plasma samples of healthy subjects are compared with the male and female validated biological reference intervals.Results  The intra-assay imprecision CV of the hs-cTnI high value sample （5.702 μg/L） was 1.56%， the total imprecision CV was 1.27%， and the intra-assay imprecision of the low-value sample （0.003 μg/L）. The CV and the total imprecision CV were both 0; the recovery of hs-cTnI was 97.50%; the LoB was 0.001 μg/L; in the detection range， the linear equation of the theoretical and measured values of hs-cTnI was Y=1.0006X-0.13136， R2=0.9999; the bio-reference interval verification results showed that 100.00% of the results were within the bio-reference interval provided by the manufacturer， and 96.67% of the results were within the bio-reference range provided by the manufacturer.Conclusion  The performance of ARCHETECT high-sensitivity troponin I kit can provide accurate and reliable quantitative detection results of hs-cTnI for clinical diagnosis， and provide important information for clinical diagnosis and treatment of myocardial injury.

Key words：High-sensitivity cardiac troponin I;Performance;Precision;Accuracy;Biological reference interval

cTnⅠ因具有特異性强、灵敏度高、发病后出现较早且持续时间较长等特点，成为目前反应心肌损伤灵敏度和特异度较高的生物学标志物，广泛应用于急性心肌梗死（AMI）的早期诊断。2012年欧洲心脏病协会（ESC）、美国心脏病学会（AHA）和世界心脏联盟（WHF）联合提出将cTnⅠ作为心肌损伤的首选标志物，2018年ESC会议期间，第四版心肌梗死全球统一定义公布，新的定义中再次强调cTn的重要性，包括高敏肌钙蛋白的重要价值[1]。近年来，随着检验技术的不断进步，新一代高敏感方法检测的试剂相继问世，许多产商纷纷推出hs-cTnI检测试剂，因此，对其性能进行评估、验证是合理地选择cTnⅠ检测方法、保障临床结果准确性的重要环节。本研究根据ISO15189《医学实验室质量和能力认可》的要求，参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）发布的EP15-A2、EP17-A、EP6-A文件[2]及其它相关文献对雅培公司生产的高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒的主要相关性能进行评价、验证。

1材料与方法

1.1 材料  ①hs-cTnⅠ低值样品组：收集无心血管、肝、胆、肾、肺等器质性疾病，心电图检查正常，无急性炎症，半年内均无大手术、输血史，血脂、血清肌酐等正常，查询资料半年内均无心血管事件发生的表面健康人60名的血浆，年龄18～78岁，其中男30人，女30人。②hs-cTnⅠ高值样品组：收集广州医科大学附属第二医院2018年8月～11月疑似或确诊AMI患者样本50例，样本无黄疸、溶血、脂血。

1.2方法

1.2.1标本采集  收集当天符合要求的标本，分离血浆于EP管中，至于-20℃冰箱中保存，仅冻融1次。

1.2.2仪器和试剂  仪器为雅培i2000化学发光免疫分析仪，使用配套hs-cTnⅠ试剂盒。

1.2.3精密度评估  根据EP15-A2文件《用户对精密度和正确度性能的验证试验》。将健康者hs-cTnⅠ低值新鲜血浆混合后测出浓度为0.003 μg/L，分装5管，每管800 μL;hs-cTnⅠ高值标本同理，混合后浓度大约5 μg/L。在仪器运行正常、质控在控的情况下，每天分析1个批次，高、低值2个浓度，每个浓度重复测量3次，连续测量5 d，记录数据，计算均值、标准差、批内不精密度及总不精密度。

1.2.4正确度评估  根据CLSI的EP15-A2《用户对精密度和正确度性能的验證试验》文件，将已知浓度校准液（校准液1浓度为10 μg/L;校准液2浓度为50 μg/L）分别加入患者样本（患者样本浓度为4.118 μg/L）中，成为回收样本1、回收样本2，原患者样本加入相同量的无分析物溶液（健康者血浆样本）作基础样本。样本制备方式如下：①基础样本：患者标本0.9 ml+健康者标本0.1 ml;②回收样本1：患者标本0.9 ml+校准液1（10 μg/L）0.1 ml;③回收样本2：患者标本0.9 ml+校准液2（50 μg/L）0.1 ml，每个样本各测3次，计算回收率。

1.2.5空白限（LoB）评估  CLSI的EP17-A《确定检出限和定量检出限方案》确定LoB。生理盐水做为空白样本每天下午测定一批生理盐水，每批重复测定3次，连续测5 d。因仪器直接报告的是浓度值，hs-cTnⅠ浓度值在低值时往往不呈正态分布，因而采用非参数方法估算第95百分位数[3]。即将数据由小到大排列，第95百分位数所在位置为空白样品总数×（95/100）+0.5。

1.2.6线性范围评估  根据CLSI的EP6-A《定量测量程序的线性评价：统计学方法》文件，取已知浓度的hs-cTnⅠ低值（浓度为0.002 μg/L）和高值（浓度为61.377 μg/L）血浆各1份，并按照高值：低值比例为5：1、2：1、1：1、1：2、1：5混成不同浓度值的血浆5份，加上低值、高值血浆共7份，每个样本测定2次，计算实际测得平均值，同时根据样本稀释方案计算预期值，后进行相关回归统计分析。

1.2.7生物参考区间评估  选择表面健康人（入选标准与低值样本组相同）血浆，其中男性30人，女性30人，60个检测数据如果不能在同一天获得，则当天留取的标本当天测定。按标准操作规程进行检测并对所得结果逐一验证是否在现有的参考区间内，若实验对象的测定值有95%以上在所选择的参考区间内，可以接受。否则，需建立合适的参考区间。

2结果

2.1精密度评估  高（5.702 μg/L）、低（0.003 μg/L）两个浓度混合血浆的批内不精密、总的不精密度符合要求，见表1。

2.2正确度评估  hs-cTnⅠ的平均回收率为97.50%，见表2。

2.3空白检出限评估  空白样本的检测结果呈非正态分布，故用非参数程序估计LoB，即估计第95%分位数的值，LoB=30×（95/100）+0.5=29位置的结果。将30个空白检测值由小到大排序，第29位置的结果为0.001 μg/L，即LoB=0.001 μg/L。在厂家声明的LoB范围（0.0007～0.0013μg/L）之内，见表3。

2.4线性范围评估  测定值为2次测定结果的平均值，与理论值做线性对比，通过计算、拟合，得出线性方程为Y=1.0006X-0.13136，R2=0.9999。线性样本检测结果见表4，线性曲线见图1。

2.5生物参考区间评估  按NCCLS C28-A2 推荐方法，验证现厂家提供的生物参考区间。根据测定结果显示，男性100.00%（30/30）的表面健康个体的检测结果落在现用生物参考区间的内，女性97.60%（29/30）的表面健康个体的检测结果落在参考区间内，说明厂家声明的生物参考区间有效，适用于本实验室，见表5。

3 讨论

肌钙蛋白是疑似急性冠脉综合征患者危险分层及心肌梗死诊断的首选生物标志物，截断值为第99百分位值。高敏肌钙蛋白可检测轻微的心肌损伤，可帮助临床更早诊断及决定治疗方案[1]。ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ作为第三代高敏肌钙蛋白检测方法，在低于第99百分位值时可检出的表观健康人群比例达96%，其试剂盒在临床实验室中使用是否可达到厂家声明的性能指标，在使用前必须按要求进行评价、验证。

精密度可以反映分析过程中随机误差的大小，是仪器整体性能首要指标，是临床检验的方法评价重要指标之一[4]。它是进行其他性能验证实验的前提，良好的精密度和准确度可为临床检测标本及后续实验提供合理可靠的检测结果。本实验结果显示，高值样本混合血浆的批内不精密和总的不精密度CV分别1.56%和1.27%，低值样本混合血浆的批内不精密和总不精密度CV均为0 。与厂家声明的室内不精密度CV≤10%对比，符合要求，该试剂盒具有良好的精密度，同时也保证了后面所展开的实验的合理可靠性。

回收试验中，校准液低值样本的回收率为96.40%，校准液高值样本的回收率为98.60%，一般情况下，加入分析物浓度高的样本比加入分析物浓度低的能有更好的回收率。在测定条件相同的情况下，这种差异的造成主要由基质效应引起，也就是商业化校准品、质控品由于与人血清基质的不同而导致了回收试验回收率的不同，反而言之，即回收率的差异反映了样本的基质效应。通常，仪器生产厂家和试剂生产厂家会由回收试验去评估所用分析方法是否受基质效应的影响，因为它直接影响着检验报告的准确性。本次实验借由校准品处理的样本带来的基质效应，得到平均回收率为97.50%，与理想结果回收率100.00%较接近，基质效应影响较小，正确度好，可保证日常检验报告单结果的准确和可靠。

LoB是指在规定的可能性条件下，空白樣品观察到的最大检测结果，空白样品重复测量结果的离散分布是随机测量误差所致[3]。当空白样本的检测结果呈非正态分布，需采用非参数程序估计LoB，本实验估计得LoB为0.001 μg/L，在厂家声明的LoB范围（0.0007～0.0013 μg/L）之内。

厂家提供的ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒性的检测上限是50 μg/L，本实验为很好地验证其线性范围，故选用高值浓度为超出厂家所给上限浓度的10%～15%内的61.377 μg/L样本，按比例稀释测定后做线性回归分析得出理论值与测量值得线性方程为Y=1.0006X-0.13136，R2=0.9999。R2接近于1，线性相关性非常好。

正确适用的生物参考区间，对临床有重要的价值，否则易导致误诊、漏诊情况的发生，因此，验证一个试剂盒的生物参考区间是否适用于本实验室也成为试剂盒性能评价的项目之一。本实验按CLSI推荐的C28-A2文件方法，验证现厂家提供的生物参考区间。根据测定结果显示，男性100.00%的表面健康个体的检测结果落在现用男性参考区间内，女性96.67%的表面健康个体的检测结果落在女性参考区间，说明厂家声明的生物参考区间有效，适用于本实验室。

综上所述，依据CLSI EP系列文件、C28-A2文件及常规方法对雅培公司生产的ARCHETECT高敏肌钙蛋白I试剂盒的精密度、正确度、空白检测限、线性范围以及生物参考区间进行了评价，实验结果显示验证通过，可为临床提供准确、可靠的hs-cTnⅠ定量检测结果，为临床对心肌损伤的诊断、治疗提供重要信息。

参考文献：

[1]刘传芬，陈红.解读：第四版心肌梗死全球统一定义[J].中华医学信息导报，2018，33（21）：20.

[2]中国合格评审国家认可委员会. CNAS-CL022012医学实验室质量和能力认可准则（ISO15189：2012，IDT）[S].2013.

[3]张秀明，冯仁丰.正确理解和使用分析灵敏度及检出限[J].中华医学检验杂志，2014，37（9）：669-671.

[4]温冬梅，张秀明，吴剑杨，等.应用CLSI EP5-A2 文件评价生化检测系统的精密度性能[J].检验医学与临床，2010，7（19）：2096-2098.

收稿日期：2019-4-9;修回日期：2019-4-29

编辑/成森