市售不同产地丁公藤药材的品质评价

罗裕 李国豪

[摘要]目的 评价市售不同产地6批丁公藤药材的品质。方法 按照2015年版《中国药典》四部通则测定市售不同产地6批丁公藤药材的水分（≤12.0%）、总灰分（≤10.0%）、二氧化硫（≤150 mg）及浸出物（≥3.0%）含量。以东莨菪内酯作为评价指标，采用高效液相色谱法进行含量测定，色谱柱为UItimate XB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水-冰醋酸（32∶68∶0.16），检测波长为298 nm。结果 市售不同产地6批丁公藤的药材水分含量范围为9.3%～12.3%;总灰分含量范围为7.5%～10.1%;二氧化硫含量为65～83 mg/kg;醇溶性浸出物含量范围为4.6%～7.2%;东莨菪内酯含量范围为0.063%～0.092%，各项测定结果均符合2015年版《中国药典》的规定。结论 对不同产地的丁公藤药材进行品质评价，可为建立更完善的丁公藤品质评价体系提供依据。

[关键词]丁公藤;东莨菪内酯;高效液相色谱法;品质评价

[中图分类号] R284.1          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2019）8（b）-0012-04

[Abstract] Objective To evaluate the quality of 6 batches of Erycibe Obtusifolia from different producing areas. Methods The contents of water （≤12.0%）， total ash （≤10.0%）， sulfur dioxide （≤150 mg） and extracts （≥3.0%） were determined according to the four general rules of the Chinese Pharmacopoeia 2015 edition. The content of scopoletin as the evaluation index was determined by high performance liquid chromatography with UItimate XB-C18 column （250 mm×4.6 mm， 5 μm） as the chromatographic column， the mobile phase was methanol-water-glacial acetic acid （32∶68∶0.16）， the detection wavelength was 298 nm. Results The water content of six batches of Erycibe Obtusifolia from different producing areas ranged from 9.3% to 12.3%， the total ash content ranged from 7.5% to 10.1%， the sulfur dioxide content ranged from 65-83 mg/kg， the alcohol-soluble extract content ranged from 4.6% to 7.2%， and the scopoletin content ranged from 0.063% to 0.092%， the results of each determination were in accordance with the provisions of the Chinese Pharmacopoeia 2015 edition. Conclusion To evaluate the quality of Erycibe Obtusifolia from different producing areas can provide a basis for establishing a more perfect quality evaluation system of Erycibe Obtusifolia.

[Key words] Erycibe Obtusifolia; Scopololamine; High performance liquid chromatography; Quality evaluation

丁公藤為旋花科植物丁公藤（Erycibe Obtusifolia Benth）或光叶丁公藤（Erycibe Schmidtii Craib）的藤茎[1]。别名包公藤、麻辣子、丹月藤、南藤等，始载于《本草拾遗》，生于林中，攀援于树上。分布广东、广西、云南、海南、浙江、江苏等地。本品性温，味辛，有毒。归心、肝二经。化学研究表明，丁公藤含有包公藤甲素（Baogongteng A）、包公藤乙素、东莨菪素、6-甲氧基-7-羟基香豆素等成份[2]。具有解毒发汗、消肿止痛等功效，治疗风湿痹痛、半身不遂、跌打肿痛等病症[3-4]。丁公藤是两广（广东、广西）等地区用于治疗风湿病的常用药，也是风湿药酒的主要原料之一。目前，市面上已有丁公藤药酒、丁公藤滴丸、复方丁公藤胶囊等多种中成药。据吴立宏等[5-6]对丁公藤基源的研究发现，市面上的丁公藤有较多混淆品，如青江藤、红叶藤、风藤、羊角藤、小花青藤等。调查发现，市售丁公藤药材存在虫蛀等质量不稳定的问题，这些因素将会影响丁公藤的临床疗效和用药安全。为此，本研究参照2015年版《中华人民共和国药典》[5]（以下简称“《中国药典》”）项下的规定，分别对来自不同产地6批丁公藤药材中的水分、总灰分、二氧化硫、浸出物及东莨菪内酯的含量进行测定，旨在为建立丁公藤药材的质量控制和品质评价提供依据。

1仪器与试药

1.1仪器及试剂

LC-20AT/JY-001高效液相色谱仪[岛津企业管理（中国）有限公司];DHG-9240A/JY-017電热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）;KQ5200VD型/JY-007数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;FA2004/JY-003电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）;AUW120D/YJ-004岛津分析天平[岛津企业管理（中国）有限公司];FW315/JY-022中草药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）;SX-8-10/JY-018箱式电阻炉（北京市永光明医疗仪器有限公司）;东莨菪内酯对照品（中国食品药品检定研究院，纯度>99%，批号：110768-200504），甲醇（上海星可高醇溶剂有限公司）为色谱纯，磷酸（美国赛默飞科技有限公司）为色谱纯;水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

1.2试药

于2018年5月从广东、广西、云南、海南、浙江、江苏等地购回丁公藤药材，共6批，经广东省新兴中药学校彭瑞松副主任中药师鉴定为旋花科植物丁公藤或光叶丁公藤的藤茎[1]。

2方法与结果

2.1不同产地丁公藤药材含水量测定结果

参照2015年版《中国药典》四部通则0832项下的烘干法[7]，对6批丁公藤药材进行水分测定，每批测定5次，药材含水量范围是9.3%～12.3%（表1），计算得6批丁公藤药材的平均含水量为11.12%。

2.2不同产地丁公藤药材总灰分测定结果

参照2015年版《中国药典》四部通则2302项下的灰分测定法，对6批丁公藤药材进行总灰分测定，每批测定5次，总灰分含量范围是7.5%～10.1%（表2），计算得平均含量是8.82%。

2.3不同产地丁公藤药材醇溶性浸出物测定结果

参照2015年版《中国药典》四部通则2201项下的热浸法，用70%乙醇作为溶剂，对6批丁公藤药材进行浸出物含量测定，每批测定5次，醇溶性浸出物含量范围是4.6%～7.2%（表3），计算得平均含量是5.96%。

2.4不同产地丁公藤药材二氧化硫测定结果

参照2015年版《中国药典》四部通则2331项下的酸碱滴定法，对6批丁公藤药材进行二氧化硫的检测，二氧化硫含量范围为65～83 mg/kg（表4），平均含量是74.2 mg/kg。

2.5含量测定

2.5.1色谱条件

UItimate XB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水-冰醋酸（32∶68∶0.16）为流动相;流速为1.0 ml/min;柱温为25℃;检测波长为298 nm，进样量10 μl。理论塔板数按东莨菪内酯计算应不低于2000。

2.5.2溶液的制备

2.5.2.1供试品溶液的制备  精密称取广东产丁公藤药材粉末（过四号筛）1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 ml，称定重量，加热回流6 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，置烧瓶中，浓缩至约1 ml，加入10 ml、3 mol/L的盐酸溶液中，水浴中加热水解2 h，立即冷却，移入分液漏斗中，用10 ml水分次洗涤容器，并入分液漏斗中，加氯化钠2 g，用三氯甲烷强力振摇提取5次，每次取15 ml，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2 g，搅拌，滤过，用少量三氯甲烷洗涤容器，滤过，滤液合并，于70℃以下浓缩至近干，立即加甲醇使其溶解，转移至10 ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。色谱见图1A。

2.5.2.2对照品溶液的制备  精密称取东莨菪内酯对照品0.00810 g，置于20 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为母液，精密量取母液1 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇制成每1 ml含40 μg的溶液，即得。色谱见图1B。

A.丁公藤供试品溶液;B.东莨菪内酯对照品溶液

2.5.3线性关系考察

取“2.5.2.2”项下的对照品溶液母液，精密量取母液0.1、0.5、1、2、3 ml分别置与10 ml的容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。按“2.5.1”项下色谱条件分别进样10 μl测定，以峰面积（Y）为纵坐标，以东莨菪内酯浓度（X）为横坐标，进行线性回归，Y=17 048X+655.11，r=1，表明东莨菪内酯进样量在0.0405～1.2150 μg范围内线性关系良好。

2.5.4精密度试验

取“2.5.2.2”项下对照品溶液母液1 ml，加入10 ml容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，按“2.5.1”项下的色谱条件测定，重复进样6次，测得东莨菪内酯峰面积的RSD为0.23%（n=6）结果表明，测定方法的精密度良好。

2.5.5重复性实验

精密称取广东产丁公藤药材粉末6份，按“2.5.2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”项下的色谱条件测定东莨菪内酯含量，结果RSD为0.46%（n=6），表明重复性良好。

2.5.6稳定性实验

取“2.5.2.1”项下供试品溶液，按“2.5.1”项下的色谱条件分别于0、1、6、12、24、48 h测定，测得东莨菪内酯的峰面积RSD为0.68%，表明供试品溶液48 h内稳定性良好。

2.5.7加样回收率实验

取广东产丁公藤药材粉末，分别称取0.25、0.5、1.0 g，精密称定，分别精密加入东莨菪内酯对照品约0.000 25、0.000 45、0.000 90 g，按“2.5.2.1”项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算得平均回收率为100.00%，RSD=2.18%，结果见表5。

2.5.8不同产地丁公藤药材东莨菪内酯含量测定结果

取6批不同产地丁公藤药材粉末各约1 g，精密称定，按“2.5.2.1”项下方法制備供试品溶液，按“2.5.1”项下的色谱条件测定，由结果可知，东莨菪内酯的含量：广东>海南>广西>云南>江苏>浙江，其中广东产丁公藤含量最高，浙江产丁公藤最低，结果见表6。

3讨论

中药品质评价的目的一方面是为了鉴别药材的真伪优劣，为中医临床服务，确保临床用药安全;另一方面是实现药材的优质优价，保证药农药商的利益。影响中药材品质的因素有水分、灰分、浸出物、有效成分含量等。目前，对丁公藤药村的评价包括以下几方面：①品种鉴定方面，如张玉洁等[3]对丁公藤及其混淆品的鉴别;吴立宏等[5]对广西产丁公藤原植物的调查及商品丁公藤主流品种的鉴定等。②化学成分研究方面，如周岳等[2]对光叶丁公藤的酚性成分进行的研究等。③含量测定方面，刘翠婷等[8-10]对丁公藤属植物中东莨菪苷、绿原酸、东莨菪素、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C的含量进行测定。④也有学者对丁公藤等5种中药材规范化种植关键技术研究等[10]。相关报道提示，目前尚缺乏对丁公藤药材进行较全面的品质评价的研究[10]。

开展丁公藤药材的品质评价包括水分、灰分、浸出物、有效成分含量等方面，本研究结果提示，不同产地的丁公藤药材水分范围为9.3%～12.3%。一般根茎类中药材含水量≤13%，超出水分范围将会影响药材的质量，可能会出现虫害、霉变等变质现象。本研究结果符合2015版《中国药典》的相关规定。测定中药材总灰分可反映中药材的纯度，如总灰分超出《中国药典》规定的最高限量，说明其含有其他无机物污染或掺杂，将会影响药材的质量。6个产地的丁公藤药材的总灰分范围在7.5%～10.1%，说明其灰分测定结果符合要求。浸出物测定是反应药材的内在质量，是确保其疗效确切、质量可靠的有效手段，本次测定的不同产地的丁公藤药材浸出物范围在4.6%～7.2%，远远高于2015年版《中国药典》的要求。采用二氧化硫熏硫药材，利于药材的储存，但也会产生二氧化硫残留，对人体产生危害，影响药材质量。目前已经被国家药监局明令禁止使用。经测定，丁公藤药材的二氧化硫含量为65～83 mg/kg，属于安全范围。

参照2015版《中国药典》丁公藤项下含量测定的要求，对云南、海南、广东、广西、浙江、江苏等不同产地的丁公藤药材中东莨菪内酯的含量进行测定[11-13]，含量范围为0.063%～0.092%，造成不同产地丁公藤药材中东莨菪内酯含量差异的主要原因可能在于药材在生长过程中受产地气候、环境、栽培方法等因素的影响[14-16]。

本研究中的丁公藤药材中的东莨菪内酯含量均符合药典要求。其中，广东、广西、云南、海南产地药材东莨菪内酯含量较高，江苏和浙江药材含量较低。

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（收稿日期：2019-01-21  本文编辑：孟庆卿）