小鼠慢性牙周炎模型中脾脏细胞表面分子及Th1、Th2型细胞因子的检测

汪育娟 杜鹃 江义笛 陈筑△

(1.贵阳市口腔医院牙体牙髓病科，贵州 贵阳 550001；2.东阳市中医院，浙江 金华 322100)

慢性牙周病是人类口腔疾病中最常见的感染性疾病之一，在我国35～44岁的成人中，慢性牙周病的发病率高达97.2%[1]。随着慢性牙周炎的不断进展，在牙周炎晚期时，可以因牙周支持组织及牙槽骨的大量丧失导致牙齿脱落，这也是目前我国成人失牙的首要原因。有研究[2]证实，在慢性牙周炎的发病过程中，宿主对致病菌的免疫应答的异常，与啮齿类动物慢性牙周炎发生、发展有密切的关系。因此，本实验通过检测慢性牙周炎小鼠模型中，免疫细胞—脾脏细胞表面分子的表达情况及小鼠血清中各型细胞因子的变化情况，探讨相关因子在牙周炎发展过程中的作用，为进一步理解慢性牙周炎的发病机制及免疫调节治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1主要实验试剂及仪器 脑心浸萃液态培养基(BHI，广州环凯)；氯化血红素(Sigma，美国)；抗酒石酸酸性磷酸酶染液(南京，建成)；FACS Calibur(Becton，Dickinson and Company，美国)；anti-mouse FITC-CD11b流式抗体(eBioscience，美国)；小鼠IFN-γ，IL-6，IL-10，TNF-α的ELISA检测试剂盒(深圳晶美)。

1.2实验动物和细菌菌株 选用健康C57BL/6小鼠，6～8周龄12只，雌性，无龋坏及牙周疾病，咬合关系正常。将小鼠分为两组，PBS对照组和牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas.Gingivalis，P.Gingivalis)组。于室温、相对湿度平均为50%且通风、无菌条件下正常喂养饲料，自由饮水摄食。动物利用细菌(或PBS)持续感染1周：每天利用棉棒蘸取菌液涂抹于小鼠口腔及牙面、牙龈沟处，每次感染1 h后再给予食物和饮水。将P.GingivalisATCC33277接种于含0.5%氯化血……