抗癌Ⅰ号方对人肝癌耐5-Fu细胞株BEL-7402/5-Fu细胞耐药性的逆转作用研究

高卓维,黄华聪,潘斯敏,林清,梁澄照,符路娣

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我国常见的恶性肿瘤，具有起病隐匿，入侵快，预后差，死亡率高的特点[1]。目前对于不能手术切除的患者的姑息治疗方法，如化疗和放疗，均有严重的不良反应和不同程度的耐药性[2]。临床实践表明肝癌细胞对化学治疗药物的敏感性低于许多其他癌症，常出现多重耐药(Multi-drug resistance, MDR)，其特点是肿瘤细胞的耐药性不仅针对特定药物，而是包括其它具有不同结构和作用机制的药物[3]。抗癌Ⅰ号方为广州中医药大学顺德医院治疗肿瘤的院内制剂，具有益气养阴、化瘀解毒的功效。临床上初步发现该方对肝癌患者增强机体免疫功能、与化疗合用协同增效及改善提高生存质量等多方面有一定的作用。本研究将在体外实验探讨抗癌Ⅰ号方对耐药肝癌细胞的逆转作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级Wistar大鼠购买自广东省医学实验动物中心(动物许可证号：SCXK粤2018-0002)。于广州中医药大学动物实验中心SPF级动物房饲养，提供清洁的饲料、饮用水以及昼夜各12 h的规律光照。动物实验通过广州中医药大学实验动物伦理委员会审查。

1.2 实验药物

实验所用抗癌Ⅰ号方(主要成分：灵芝、铁皮石斛、白花蛇舌草、藤梨根，辅料为蜂蜜)由广州中医药大学顺德医院药剂科供。P-gp和β-actin的抗体购自美国CST公司。BCA蛋白定量试剂盒、蛋白酶与磷酸酶抑制剂、RIPA细胞裂解液购买自碧云天生物科技有限公司。PVDF膜、ECL发光液购买自Millipore公司。MTT购买自美国SIGMA公司。

1.3 实验器材

BIO-RAD电泳仪、蛋白转印系统购买自美国伯乐太平洋有限公司，曝光机为KODAK 全光谱多功能活体成像系统、酶标仪购买自美国SIGMA公司，MICROMAX高速离心机购买自赛默飞世尔科技公司。……