牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗的制备及其免疫效果

钱 坤，王 虹

（1.天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心 300402；2.天津市动物疫病预防控制中心 300402）

所谓牛病毒性腹泻（BVDV），主要指的是牛病毒性腹泻病毒所引发的牛类出现呼吸道疾病、腹泻、繁殖异常、免疫机能受损等为主要特点的传染病。 当该病毒进入到人体之后，会造成免疫抑制以及持续化感染现象。 当其持续感染牛类之后，会令其终身带有病毒并排毒， 最终形成传染源。 这在一定程度上加大了BVDV 疾病的诊断以及防治的难度水平。 和以往相比，BVDV 于中国感染情况更为严重。 这种情况给我国养禽业造成了不可挽回的经济损失[1]。 疫苗接种为防控此类疾病发生以及发展的重要举措。 但值得说明的是，现如今中国还没有商品化BVDV 疫苗，进口疫苗虽然说能够取得一定效果， 但价格较为昂贵， 较难推广。 基于此，本试验全面分析牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗的制备以及免疫效果，现将相关内容报告如下。

1 研制牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗的意义

牛病毒性腹泻病毒会感染多类宿主，其在全球范围内广泛流行。 依照BVDV 5’UTR，Npro 等基因序列的差异能够将BVDV分成两类基因型[2]。 即为：BVDV-1 以及BVDV-2。 就生物学角度进行分析， 每个基因型也可以被分为致细胞病变型以及不致细胞病变型两种。当发生BVDV 感染之后，机体会呈现出较为典型的临床症状。具体表现为免疫抑制、腹泻、发烧等。当病毒感染牛类之后， 其会形成相当重要的感染源。 现如今， 国际上用于BVDV 的防护措施主要有两种： 一是有效鉴别以及扑杀持续性感染动物；二是疫苗免疫。 而针对于BVDV 的诊断，主要从抗原以及抗体方面着手。 灭活疫苗由于在使用过程中安全性好，其有较高经济价值，可以有效的预防该病的发生和流行。 相关研究证实，在接种BVDV 疫苗以后，能够全面减少怀孕母牛流产、减少持续性感染流产等。 由此能够看出，研制我国自主开发的牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗，有着相当重要的现实意义。

2 牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗制备过程

2.1 病毒增殖和细胞毒量测定

2.2 病毒液灭活以及检验

2.3 油佐剂灭活疫苗相关制备。 在此其中包含了有效的制备以及水相的制备、乳化3 个步骤。

2.4 灭活疫苗无菌检验。 在进行该项工作过程中，应当全面依照《中华人民共和国兽药典（2010 版）》三部中的方法，针对于所制备的BVDV 有所系灭活疫苗开展无菌检验。

2.5 灭活细胞性状检验。 其中包含外观检验进行检验、稳定性检验以及年度水平检验。

2.6 灭活疫苗，安全性检验。

2.7 灭活疫苗免疫成果实验。在此其中包含抗体效价检测以及免疫攻毒保护试验两个步骤。

3 牛病毒性腹泻病毒灭活疫苗具体免疫效果

有文献证实，依照BVDV 的病毒基因序列差异，可将其分为BVDV-1 以及BVDV-2 的基因型。 前者又被分为18 个基因亚型，在此其中，在全球范围内所流行的主要2 个亚型，具体为：BVDV-1a 以及BVDV-1b。 现如今，BVDV-1b 为我国牛群最优势流行毒株。 自从牛病毒性腹泻病毒被发现之后，其短时间内在全世界范围内广泛流行。 并且这种病毒有着难以防控的特点。由此能够看出， 全面强化BVDV 疫苗接种是控制牛病毒性腹泻发生以及发展的重要举措。 因为当前中国主要依靠进口BVDV 疫苗，且现如今国际市面上所出售的商品化BVDV 疫苗几乎所有都是通过BVDV-1a 亚型毒株所制备。 BVDV 各个基因型以及亚型都有着一定的交叉保护性。 交叉保护力和毒素自身特点存在一定关联性。

从一定角度来讲，BVDV-1a 亚型疫苗较难针对于中国地区所发生的BVDV-1b 亚型流行毒株不能提供周全保护成效[3]。 因此， 有必要针对于BVDV-1b 亚型流行毒株的新型疫苗开展研究。 当前，灭活疫苗以及弱毒活疫苗为BVDV 常用的疫苗种类。前者免疫期相比较长，而后者的免疫期则较短。 因为该病毒类型会持续化感染。 所以说，BVDV 弱毒疫苗的安全性不佳。 特此，选择白油视为疫苗佐剂所制备出的BVDV-1b 亚型油乳剂灭活疫苗，能够在一定程度上提升其安全性。 通过抗体消长规律实验证实：此类疫苗在免疫4.0mL 后，中和抗体水平会呈现出一个较为显著的快速上升过程。 并且在维持一段时间之后呈现出缓缓降低趋势。免疫之后的第30d，综合抗体效价会达到高峰值，并一直维持其水平。直至第120d 后，呈现出下降表现。 到了免疫后的第180d，综合效价依旧在6.0lb 以上。 通过免疫攻毒保护实验，结果证实： 予以免疫该疫苗2.0mL 之后21d 之内， 能够对BVDV-1b强毒株攻击起到保护作用。 这种疫苗安全性以及免疫原性均较好，不会造成免疫抑制现象，并且也不存在三度风险，其能够为BVDV 流行毒株预防控制提供了安全有效的预防方式，因此值得推广。