外源性生殖激素对北极狐的生殖机能的影响

王巨龙 ，王西军，萧 晟，王本忠，黎 婷

(1.芜湖职业技术学院生物工程学院，安徽芜湖 241003；2.山东潍坊盛世富民合作社，山东潍坊 261100)

0 引言

特种经济动物北极狐作为重要的皮毛动物，已成为我国皮裘市场的支柱产业之一.近年来，随着北极狐大规模的养殖，在自然发情的状态下出现初产母狐乏情、发情不明显、产仔数低和无法集中发情等生殖机能障碍[1].这些现象严重影响北极狐的繁殖力，加重养殖户的饲养成本.早在20世纪初，我国科研工作者便开展了家畜动物发情研究[2].当前研究多为外源性生殖激素FSH和PMSG对卵泡发育及LH和hCG 对排卵影响.这些方法和技术已成功应用于牛、羊、猪等家畜动物中[3-5]，并取得重大的经济效应.1994年，白云君、刘志平等人对蓝狐和银黑狐进行了休情期的超排处理，初步探索了蓝狐和银黑狐超数排卵技术的基本方法和影响因素[6-7].对于使用外源性生殖激素孕马血清促性腺激素PMSG对狐狸促发情效果的观察研究，崔青山等人的研究结果表明，采用PMSG450 IU和hCG600 IU可获得较好的发情效果[8].当前，关于PMSG和hCG对北极狐发情及组合使用对其繁殖性能的影响，目前尚未有报道.本研究我们拟探究外源性生殖激素PMSG和hCG对初产北极狐繁殖性能的影响，以此提高养殖户的经济效益.

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验选用体重达11～13 Kg健康初产雌性北极狐，这些试验狐均来自山东潍坊富民合作社.这些狐随机分笼饲养，2～3只一笼，1月份后单笼饲养，定时投喂饲料(注：试验喂养的北极狐饲粮是由合作单位提供的饲料.饲料中动物性饲料占60%～70%，主要有鱼类、血、虾类及畜禽副产品，植物性饲料占30%左右，主要有玉米、小麦、麦麸等)，自由饮水.

1.1.1 试验药品及器械 生理盐水、孕马血清促性腺激素PMSG(宁波第二激素厂)、人绒毛膜促性腺激素hCG(宁波第二激素厂)、人工授精器械、10 mL 注射器、消毒酒精、载玻片、显微镜、镊子.

1.1.2 试验时间 2018.2.4-2019.7.15

1.2 试验方法

1.2.1 试验设计一 选取60只母狐随机分成4组，每组15只.其中A、B和C为试验组，D为对照组，外源生殖激素处理如表1所示.然后统计发情率、受胎率、产仔数.

1.2.2 试验设计二 选取55只母狐随机分成4组，其中A、B和C为试验组.按试验设计一注射后进行发情鉴定，对发情母狐在人工授精前12 h注射对应等量的hCG.统计发情率、受胎率和产仔数.

1.3 发情鉴定的判定

北极狐的发情表现主要包括其外生殖道变化、行为表现以及阴道上皮细胞变化等方面.通过外生殖器官及阴道上皮细胞检查综合判定发情，确保母狐处于最佳的人工授精时间，确保母狐受胎率.

1.3.1 外生殖器官检查 母狐发情期通常在春季出现，外生殖器官发生特征性生理变化，大致分为3个时期.

第一时期：由静止期到发情前期，阴毛覆盖的阴门开始变为外凸肿胀，阴门略开，极少可见有粘液流出，阴毛分开，阴蒂开始增大.此时，母狐狸出现生理性冲动，接近公狐狸但不接受爬跨.

第二时期：发情期，阴门持续肿胀近圆形，肿胀面如硬块，表面充血，阴蒂增大呈红润色，有少量的粘液从阴门流出.母狐表现异常兴奋，表现活跃，开始主动接触公狐狸，但拒绝接受交配.

第三时期：发情期到发情后期，此阶段母狐阴门肿胀呈圆形，肿胀面变软，出现轻微皱纹，颜色变深，外翻，阴门处可见有白色乳白色的分泌物.母狐表现安静，主动接近公狐狸并翘起尾巴，接收公狐爬跨完成交配.此阶段也是人工授精的最佳时间.

1.3.2 阴道上皮细胞图像检查 取少许北极狐阴道分泌物，制成涂片置于显微镜下观察，并记录发情.根据母狐阴道分泌物细胞图像，其发情周期可大致分为四个时期.发情静止期，涂片仅见大量球形的白细胞；发情前期，白细胞大量消失，视野下可见少量多角形有核角化上皮细胞；发情期，白细胞消失，多角形有核角化上皮细胞明显增多，此时处于最佳授精时间；发情后期，多角形角化上皮细胞，出现碎裂，白细胞出现.

1.4 人工授精技术

为了保证精液中精子数量与精子活力高，提高北极狐受孕率，试验采集新鲜种用北极狐精液，3倍精液稀释，人工授精每次所输的精子数量不低于4 000万个[9-10].一人将发情的母狐固定并提起尾巴，另一人一手持输精管，一只手握住子宫颈口位置，缓慢的插入输精针置于子宫内，将精液注入子宫内.北极狐的排卵可持续3 d，要求24 h内必须复配，连续输精3次，统计北极狐的受胎率.

1.5 数据统计与分析

实验数据通过SPSS 17.0软件进行LSD多重比较进行显著性分析.

发情率=发情母狐总数/试验母狐总数*100%；

受胎率=妊娠母狐总数/发情母狐总数*100%；

产仔数/窝=妊娠母狐产仔总数(包括死胎和死产)/妊娠母狐数；

产活数/窝=出生一个月后存活的幼仔总数/妊娠母狐总数.

2 试验结果与分析

2.1 PMSG对北极狐生殖能力的影响

利用外源性生殖激素PMSG对北极狐发情率、受胎率、产仔数、产仔数/窝、产活数/窝的影响.结果显示(表1)，肌注PMSG剂量为100 IU，其发情率达86.7%、受胎率为92.3%.与对照组相比，肌注PMSG200 IU北极母狐的发情率为100%，母狐的发情率、受胎率、产仔数显著的提高.其产仔数/窝提高了1.45只，产活数/窝提高1.405只.B组与C组在发情率100%情况下，C组的受胎率、窝产数、产活数要高于B组.

表1 不同剂量PMSG 对母狐生殖能力的影响Tab.1 Effect of different doses of PMSG on the reproductive function of female arctic fox

2.2 PMSG与hCG协同对北极狐生殖能力的影响

为进一步探究PMSG与hCG协同对北极狐生殖能力的影响，处理如表2所示.结果显示，PMSG配合hCG北极狐受胎率表现为86%～100%，其中使用150、200 IUPMSG配合等量单位的hCG，北极狐受胎率达100%，显著高于对照组的85.7%的受胎率；与对照组相比，150 IUPMSG配合hCG作用下，可显著提高北极狐的窝产数及产活数.其窝产数、产活数分别提高2.7只、3.4只.B组与C组在受胎率100%情况下，B组的窝产数、产活数分别要高于C组.

表2 PMSG与HCG对母狐生殖能力的影响Tab.2 Effects of PMSG and HCG on the reproductive function of female arctic fox

3 讨论

生殖激素是调控动物发情周期的关键因素.通过外源性注射生殖激素可以促进卵泡发育，利于卵子排出.当前在许多国外大型规模化家畜养殖场内，外源性生殖激素已得到了广泛的应用[11].我国在这方面的研究也取得了较好的经济效果.北极狐属犬科，季节性单次发情且发情期持续3～5 d[12].北极狐发情和配种集中在每年的2月份中旬，然而年轻适配的母狐往往出现发情不明显，延期发情或不发情等生殖障碍[1]，造成生产管理上困难，饲养成本增加.

外源性PMSG又称孕马血清促性腺激素，其功能为刺激卵巢发育，促进动物卵泡发育.HCG 激素可促进卵泡成熟、排卵和黄体出现，两者同时应用具有协同作用.在家畜生产使用PMSG激素诱导动物发情，促进闭锁卵泡发育及成熟，利于动物超数排卵.如崔青山[8]研究显示，利用PMSG对母狐的催情的效果达100%.我们试验使用150 IU及200 IUPMSG所获结果与其研究结果一致.合理利用PMSG剂量能够提高年轻母狐的发情率，便于北极狐集中繁殖管理.

PMSG和hCG协同配合使用可提高动物的繁殖能力.外源生殖激素协同作用研究已应用于牛、猪、水貂等动物上.李非平等[13]等人研究显示通过注射外源性生殖激素PMSG和hCG可提高母猪的产仔数.本文的研究显示PMSG和hCG在150 IU显著提高北极狐繁殖性能，窝产数比对照组高32.5%.但在高剂量200 IU作用下，产仔数低于150 IU组.表明高剂量生殖激素可能会产生负效应.很大可能是卵巢受到过度刺激作用，出现卵母细胞发育停滞或成熟卵子不排出现象[13].这也有待于我们后期进一步研究.