杜仲抗菌肽EuCHIT1对白色念珠菌的抑菌作用及机制研究△

赵丹，张湘燕，罗振华，董旋，赵德刚*

1.贵州省人民医院 呼吸与危重症医学科/贵州省呼吸疾病研究所，贵州 贵阳 550002；2.肺脏免疫性疾病诊治国家卫健委重点实验室，贵州 贵阳 550002；3.贵州省人民医院 中心实验室，贵州 贵阳 550002；4.贵州大学 生物工程研究院/贵州大学 生命科学学院，贵州 贵阳 550002

杜仲为杜仲科杜仲属植物杜仲EucommiaulmoidesOliv.的干燥树皮，味甘、微辛，性温，可以降压，利尿，缓解头晕、失眠等症状，对各种细菌、真菌具有抑制作用，但具体机制尚不明确。抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs)，又称抗微生物肽或肽抗生素，是一类小分子的多肽类物质，一般由10～60个氨基酸残基组成，相对分子质量在3000～6000[1]。抗菌肽广泛分布于动物、植物等生物体内，构成了机体防御病原体快速而高效的屏障。本课题组前期研究证实，转杜仲几丁质酶基因EuCHIT1的番茄可提高对灰霉病的抗性[2]。因此，推断多肽EuCHIT1是杜仲中的抗菌肽之一。本研究在前期工作的基础上，利用原核表达、镍亲和色谱法纯化得到抗菌肽EuCHIT1，体外检测其对白色念珠菌的抑菌作用，并探讨其抑菌机制，为其进一步的临床应用提供参考。

1 材料

1.1 菌株及细胞

白色念珠菌CanidiaalbicansATCC 10231，由贵州省人民医院中心实验室罗振华主任惠赠；SD大鼠肺组织WTRL1细胞购于美国模式菌种收集中心(ATCC)细胞库。

1.2 试药

沙堡氏(4%)葡萄糖琼脂培养基(广州市齐云生物技术有限公司)；氟康唑注射液(批号：2003070512)由辰星药业有限公司生产；邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷(ONPG)购自上海仁捷生物科技有限公司；细胞膜荧光探针DiSC3(5)购自美国AAT Bioquest Inc公司；……