Talin2通过Caspase3信号通路调控乳腺癌细胞侵袭

董奕裕 黄晓文 李建兰

1浙江省荣军医院实验室（浙江嘉兴314000）；2武警海警总队医院检验科（浙江嘉兴314000）

肿瘤细胞自身的侵袭力和转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因［1-2］。位于肿瘤细胞周围的细胞外基质（extracellular matrix，ECM）是肿瘤微环境的基本组成部分，肿瘤细胞与ECM黏附，通过ECM的降解达到转移，同时也为肿瘤生长提供必要的生长因子［3］。Talin直接与β-整合素细胞质尾部结合，然后通过其肌动蛋白结合域直接连接整联蛋白与细胞骨架［4］，对肿瘤的生长和转移起着至关重要的作用［5］。在脊椎动物中有两个Talin基因 TLN1和 TLN2，编码 Talin1和 Talin2，Talin2与Talin1有74%的同源性，Talin1可调节粘着斑（focal adhesion，FA）动力学、细胞迁移和细胞侵袭［6-7］；最近的研究［8］表明Talin2 knockdown能抑制肝癌细胞的迁移，但关于Talin2在肿瘤侵袭和转移中的作用机制目前还不清楚。本研究拟通过Talin2 shRNA慢病毒感染MDA-MB-231细胞构建Talin2 knockdown稳定细胞系，研究Talin2对MDA-MB-231细侵袭的影响，分析Talin2通过细胞凋亡途径在乳腺癌发生和发展中的作用和机制，为乳腺癌诊断和治疗提供新的方法和依据。

1 材料和方法

1.1 主要细胞、试剂 细胞株MDA-MB-231由温州医科大学检验与生命科学学院实验室保存；质粒由该实验室提供；胎牛血清、DMEM培养基购自Gibco；LipofectaminTM2000均购自 Invitrogen公司；Talin2转染细胞株通过嘌呤霉素筛选。

1.2 方法

1.2.1 细胞转染及稳定细胞系的建立 按照lipofectamintm 2000转染试剂产品操作手册进行，以pLentiLox3.7慢病毒核心空载体和包装质粒VSVG、RSV-REV和pMDLg/pRRE按一定比例混合，采用脂质体共转染慢病毒系统转染293T细胞，于37℃、5%CO2培养48～72 h。将收集的病毒微粒感染乳腺癌细胞MDA-MB-231，并过夜培养。用1 mg/mL嘌呤霉素作用于感染的细胞20 d，筛选稳定表达慢病毒shRNA空载和Talin2 shRNA的细胞系