土木香内酯对人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响

张 旭 田召辉 郭 琳 娄永利

胶质瘤是颅内最常见的一种原发性恶性肿瘤， 呈弥漫性无限增殖，即使采用手术联合放、化疗等治疗，预后仍不理想[1，2]。土木香内酯具有抗炎、抗氧自由基等药理活性[3]。研究发现，土木香内酯通过消耗癌细胞内谷胱甘肽是促进活性氧（reactive oxygen species，ROS）的生成，活化肝癌细胞内蛋白酶水解酶，进而诱导癌细胞凋亡[4]。抑制癌细胞增殖是抗癌的重要手段之一。癌细胞增殖涉及多种因子的调控，如周期素D1（cyclin D1）、c-Myc、周期素依赖激酶4（cyclin dependent kinase 4，CDK4）等[5]。另外，磷酸肌醇依赖激酶-1（phosphoinositide-dependent kinase 1，PDK1）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/Akt）/糖原合成酶激酶-3（glycogen synthase kinase-3β，GSK3β）通路在细胞增殖中发挥重要作用[6～8]。本文探讨土木香内酯对人胶质瘤U251细胞增殖、调亡的影响及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 细胞培养及分组 人胶质瘤U251细胞（上海中国科学院）置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液（上海经科化学科技有限公司）中，在恒温保养箱中培养，取处于对数期的U251细胞制成浓度为1×105/ml的混悬液，每孔100μl接种于96孔板中，培养至细胞完全贴壁后，以1:10将母液稀释，制成100 μmol/L浓度，分别加入浓度为2.5、5、10μmol/L的土木香内酯（纯度＞98%，20 mg/支，南京道斯夫生物科技有限公司）。同时设空白对照组。

1.2 U251细胞增殖抑制率的检测 土木香内酯作用24 h后，每孔各加入20μl MTT溶液，4 h后停止培养，去上清。每孔加入二甲基亚砜溶液，使用摇床低速充分振荡。测量吸光度（optic Density，OD）。细胞增殖抑制率（%）=（1-实验组OD值/对照组OD值）×100%[9]。

1.3 U251细胞凋亡率的检测 土木香内酯作用48 h后，离心5 min，去上清，制作单细胞悬液。在Annexin V-PI染色液中避光染色，采用流式细胞仪（Thermo公司）检测细胞凋亡率。……