超声波辅助杂多酸提取竹叶多糖工艺优化及其生物活性研究

(浙江科技学院生物与化学工程学院,浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室,浙江省农业生物资源生化制造协同创新中心,浙江杭州 310023)

竹子属于禾本科竹亚科常绿植物,中国是竹资源大国,竹林种植面积达到500万公顷,世界上排名第一[1]。竹叶作为竹材的副产品,长期未得到有效的利用,随着社会的发展人们对生物质资源越来越重视,竹叶的开发利用成为热点。竹叶中含有大量的纤维素和半纤维素,理论上可以制备单糖、葡聚糖、木聚糖、阿拉伯木聚糖、葡萄甘露聚糖、阿拉伯半乳聚糖等多糖或低聚糖。多糖是一类广泛存在于动物、植物及微生物等有机体中的大分子化合物,聚合度一般大于10[1],在自然界中储量十分丰富,主要分为植物多糖、动物多糖和微生物多糖[2-3]。大量研究表明多糖具有抗肿瘤、抗氧化、抗辐射、降血糖、调节机体免疫功能和抑菌等生理活性[4-8]。中医理论认为竹叶味甘、性寒,具有利尿、清心除烦的功效,大量研究表明竹叶多糖是一种大分子杂多糖且具有抗癌功能,能增强机体的免疫能力,有抗氧化、降低血糖和抑菌等多种生理功能[9-12]。因此,竹叶多糖作为天然产物,其毒副作用非常小,其发展应用前景较广阔。

目前,关于竹叶多糖的研究主要围绕在提取工艺的优化,但对竹叶多糖的生物活性研究较少。竹叶多糖传统的提取方法有超声波提取法[13-14]、酶提取法[15]、水浸提法[16]等提取方法,这些传统的提取方法具有原料消耗大、提取时间长、得率低、工业化生产难度高等缺点。传统的提取方法不能从竹叶中提取出大量的多糖,因此,将多种方法协同起来提取竹叶多糖成为一种趋势。同时,竹叶多糖生物活性研究主要围绕在抗氧化、抑菌等基础的生物活性,关于抗肿瘤方面的研究较少。

本文以一年生毛竹竹叶为主要试材,通过超声固体杂多酸技术提取毛竹竹叶多糖,提高竹叶多糖的得率,并对其结构与组成进行初步鉴定,将获得的竹叶多糖进行体外抗氧化活性和抗肿瘤活性研究,其主要目的是提高竹资源利用效率,为竹产业的转型升级助力。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

一年生新鲜毛竹竹叶1 kg 3月份自摘于浙江科技学院后山;鼠李糖、岩藻糖、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖、果糖、葡萄糖醛酸 分析标准品,阿拉丁;半乳糖醛酸分析标准品 北京索莱宝科技有限公司;磷钨酸、氢氧化钠、乙酸钠 分析纯,美国赛默飞世尔科技公司;浓硫酸、苯酚、无水乙醇 分析纯,上海凌峰化学试剂有限公司;MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 碧云天生物技术;基础培养基(MEM)、胎牛血清、胰蛋白酶、双抗 武汉谱诺赛生命科技有限公司。

ICS-5000+离子色谱仪、电化学检测器(Au为工作电极,Ag/AgCl为参比电极)、Heraeus Multifuge X1R离心机、二氧化碳培养箱、MSC-AdvantageTMII 级生物安全柜 美国赛默飞世尔科技公司;UNIQUE-LC多功能超纯水系统 瑞斯捷;BSA124S分析天平 德国赛多利斯;DHG-9013A烘箱 上海一恒科学仪器有限公司;超声波反应釜 上海霍桐实验仪器有限公司;SpectraMax iD3多功能酶标仪 美谷分子仪器有限公司;傅立叶变换红外光谱仪 德国布鲁克仪器公司;EM-1011透射电镜 日本电子公司;倒置显微镜 日本奥林巴斯公司。

1.2 实验方法

1.2.1 原料预处理 将新鲜采摘的毛竹竹叶除杂、纯水清洗、烘干至恒重、粉碎,加入3倍体积的95%乙醇抽提,重复3～4次,60 ℃烘干至恒重,使用水分测定仪测其含水率,烘干密封,备用。

1.2.2 竹叶多糖提取及含量测定 称取竹叶粉加入到100 mL的超声波反应釜中,加入一定量的水和一定质量分数的磷钨酸,在反应器中按照一定的超声功率和一定的超声温度反应一定的时间,布氏漏斗抽滤,除去残渣,加入最终浓度为80%的无水乙醇,4 ℃静至12 h,8000 r/min下离心获得竹叶多糖沉淀。分别经过Sevage法除去蛋白质、真空冷冻干燥,最终得到竹叶多糖。

采用苯酚-硫酸法检测样品中多糖含量[17-18],以葡萄糖为标准品,以多糖的质量浓度(x)为横坐标,吸光度(y)为纵坐标,得到标准曲线y=0.007x-0.0047,线性范围为20.00～120.00 μg/mL,相关系数R2为0.9999。吸取25 μL多糖溶液,根据标准曲线计算多糖浓度,按照式(1)计算多糖含量。

式(1)

式中:c为样液中多糖浓度(μg/mL);V为样液体积(m/L);M为样品质量(g)。

1.2.3 单因素实验 以竹叶多糖的得率为考察指标。分别考察超声波功率、磷钨酸的质量浓度、超声温度、超声时间以及料液比对多糖得率的影响。

1.2.3.1 超声功率对竹叶多糖得率的影响 精密称取3.0 g竹叶粉,在磷钨酸质量浓度为4.5%,超声温度为80 ℃,超声时间为2 h,料液比为1∶20 g/mL下,分别考察超声功率60、120、180、240、300 W对竹叶多糖得率的影响。

1.2.3.2 磷钨酸质量浓度对竹叶多糖得率的影响 精密称取3.0 g竹叶粉,在超声功率为300 W,超声温度为80 ℃,超声时间为2 h,料液比为1∶20 g/mL下,分别考察磷钨酸质量浓度0.5%、1.5%、2.5%、3.5%、4.5%对竹叶多糖得率的影响。

1.2.3.3 超声温度对竹叶多糖得率的影响 精密称取3.0 g竹叶粉,在超声功率为300 W,磷钨酸质量浓度为4.50%,超声时间为2 h,料液比为1∶20 g/mL下,分别考察超声温度60、70、80、90、100 ℃对竹叶多糖得率的影响。

1.2.3.4 提取时间对竹叶多糖得率的影响 精密称取3.0 g竹叶粉,在超声功率为300 W,磷钨酸质量浓度为4.50%,超声温度为80 ℃,料液比为1∶20 g/mL下,分别考察提取时间1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 h对竹叶多糖得率的影响。

1.2.3.5 料液比对竹叶多糖得率的影响 精密称取3.0 g竹叶粉,在超声功率为300 W,磷钨酸质量浓度为4.50%,超声温度为80 ℃,提取时间为2 h下,分别考察料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50 g/mL对竹叶多糖得率的影响。

1.2.4 响应面试验 在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken试验设计原理,以料液比(A)、反应温度(B)和提取时间(C)这3个因素为自变量进行组合优化,以多糖得率(Y)为响应值,进行响应面分析。试验设计与水平见表1。

表1 响应面实验的因素及水平Table 1 Levels and factors of response surface experiment

1.2.5 竹叶多糖结构分析

1.2.5.1 红外光谱分析 准确称取1.0 mg干燥的竹叶多糖与 KBr 粉末于研钵中研磨混合均匀,压成薄片,在波4000～400 cm-1范围内利用红外光谱仪进行光谱扫描[19-22],分辨率为0.09 cm-1。

1.2.5.2 多糖物理形貌分析 采用电子扫描显微镜(SEM)将反应前后的原料及竹叶多糖放大5.5×103倍进行表征。表征前需对样品进行喷金处理,电镜工作电压为10 kV。

1.2.5.3 竹叶多糖单糖组成分析 准确称取适量竹叶多糖,加入适量的2 mol/L三氟乙酸(TFA),在110 ℃下封管2 h。将水解液低于40 ℃条件下减压蒸干,加入3 mL甲醇蒸干,重复4～5次,以完全除去TFA[23-25]。用超纯水定容到5 mL容量瓶中,采用高效阴离子色谱法检测多糖水解液中单糖组成。

色谱条件:ICS-5000+高效阴离子色谱仪(HPAEC)、CarboPACTMPA10(4.0 mm×250 mm)阴离子交换柱(带保护柱)、四电位波形。流速为0.80 mL/min;柱温为20 ℃;进样体积为25 μL,流动相为氢氧化钠和乙酸钠。竹叶多糖水解液梯度淋洗程序:0～30 min:2.5% 200 mmol/L NaOH和5% 200 mmo/L CH3COONa混合洗脱;30.1～53 min:50% 200 mmol/L NaOH和50% 200 mmol/L CH3COONa混合洗脱;53.1～56 min:100% 200 mmol/L NaOH洗脱;56.1～60 min:100% 200 mmol/L NaOH洗脱。

1.2.6 竹叶多糖体外抗氧化活性研究

1.2.6.1 DPPH自由基清除能力的测定 用无水甲醇将DPPH试剂配制成1×10-4mol/L的溶液。准确吸取不同质量浓度(0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mg/mL)竹叶多糖待测样液各2 mL,分别加入DPPH溶液4 mL,混合均匀,在25 ℃恒温水浴下,放置30 min,于517 nm波长处测定吸光度[26-27]。以去离子水作为参比溶液、相同浓度的VC溶液作为阳性对照,按照式(2)计算DPPH自由基清除率。

式(2)

式中:A0为去离子水+DPPH-甲醇溶液吸光度;A1为样品+DPPH-甲醇溶液吸光度;A2为样品+甲醇溶液吸光度。

1.2.6.2 还原力的测定 将1 mL不同质量浓度的竹叶多糖溶液(0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00 mg/mL)分别与2.5 mL pH=6.6的磷酸盐缓冲溶液以及2.5 mL 1%的铁氰化钾(w/v)混合,于50 ℃恒温水浴中反应30 min,然后加入2.5 mL 10%的三氟乙酸和0.5 mL 0.1%三氯化铁(w/v)终止反应,离心10 min,取上清液2.5 mL,依次加入2.5 mL去离子水和0.5 mL 0.1%的三氯化铁(w/v),混合均匀,在700 nm下测定吸光度[28-29]。以去离子水为参比溶液,以相同浓度的VC溶液作为阳性对照。

1.2.6.3 ABTS+自由基清除能力 取7.00 mmol/L ABTS+和5.00 mmol/L过硫酸钾等体积混合,在室温下黑暗放置12～16 h,得到ABTS+储备液,用PBS缓冲溶液将储备液稀释,使其在734 nm波长下吸光度值在0.7±0.02之间,备用。取不同质量浓度的竹叶多糖溶液(0.30、0.50、0.70、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mg/mL)300 μL,分别加入5 mL上述稀释液,在30 ℃条件下,反应1 h,在734 nm波长下测定吸光度[30-31]。以去离子水作为参比溶液,相同浓度的VC溶液最为阳性对照。按照式(3)计算ABTS自由基清除率。

式(3)

式中:A0为去离子水+ABTS+自由基PBS溶液吸光度;A1为样品+ABTS+自由基PBS溶液吸光度;A2为样品+PBS溶液吸光度。

图1 不同因素对竹叶组多糖提取率的影响Fig.1 Effects of different factors on the extraction rate of bamboo leaves polysaccharides

1.2.7 竹叶多糖体外抑制肿瘤细胞增殖实验 采用MTT法进行测定。人肝癌细胞HepG-2生长于EMEM基础培养基中,在37 ℃ 5% CO2条件下培养并传代。将处于对数期的HepG-2细胞用胰蛋白酶消化后加入新鲜的EMEM基础培养基配置成浓度为1×105cell/mL,每孔100 μL加入到96孔板内。置于37 ℃、5% CO2的培养箱中培养24 h,待细胞贴壁后。培养液中加入不同浓度的多糖(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/mL)100 μL各组分继续孵育48 h。阴性对照由未经处理的细胞设定。培养结束后,用显微镜对各组的细胞进行观察,弃上清液,每孔加入100 μL PBS清洗一次,每个孔中添加10 μL 新鲜配制的MTT(5.00 mg/mL)和100 μL新鲜的EMEM基础培养基。经过4 h的培养后,用Formazan(100 μL)溶解形成的晶体,恒温振荡培养箱摇匀。用酶标仪在波长570 nm处测定吸光度,按照式4计算竹叶多糖的肿瘤细胞抑制率。

式(4)

式中:A0为空白对照孔的吸光度;A1为样品孔的吸光度。

1.3 数据处理

所有实验均重复3次,响应面优化实验数据采用Design-Expert 8.0.6软件进行二次回归分析及方差分析,其余实验结果均采用Origin 9.0软件进行处理。

2 结果与分析

2.1 竹叶多糖提取单因素实验结果

竹叶多糖提取过程中磷钨酸质量分数、超声温度、超声功率、提取时间、料液比对提取竹叶多糖效果的影响见图1。

由图1a可知,随着磷钨酸质量分数的增加,竹叶多糖得率逐渐上升,这是由于磷钨酸破坏了竹叶细胞壁结构,促进了竹叶多糖的浸出。当磷钨酸质量浓度在0.5%～4.5%范围内时,竹叶多糖得率随着磷钨酸质量浓度上升呈现逐渐升高的趋势,当磷钨酸质量浓度为4.5%时,竹叶多糖得率最高,考虑到成本问题如果进一步增加磷钨酸质量浓度,将会提高成本。因此,选择磷钨酸质量浓度为4.5%作为最佳反应浓度。

如图1b,随着提取温度的上升,竹叶多糖得率呈现先上升后下降的趋势,随着温度的上升促进了分子运动,加快了多糖的浸出;但是随着温度的进一步上升,促进了多糖的降解。因此,选择80 ℃作为最佳反应温度。

图1c表明,随着超声功率的提高,竹叶多糖得率呈上升趋势,由于超声波产生的空化作用,促进了多糖的浸出。由于仪器原因,最大功率只能达到300 W,因此,选择超声波功率300 W为最佳反应功率。

由图1d可知,随着提取时间的增加,竹叶多糖的得率逐渐上升,在2 h时达到最大值。2 h后,竹叶多糖得率呈现相对平稳的状态,因此,选择最佳反应时间为2 h。

图1e表明,随着料液比的增加,竹叶多糖的得率呈现先上升后下降的趋势,当料液比为1∶20 g/mL时,竹叶多糖得率最大,因此,选择最佳料液比为1∶20 g/mL。

2.2 响应面法优化提取工艺

2.2.1 响应面试验结果及方差分析 响应面实验结果见表2,利用Design-Expert 8.0软件,建立料液比、提取温度及提取时间三因数数学回归模型为:

Y=9.64+0.89A+0.61B+0.12C-1.25AB-0.28AC-0.65BC-1.51A2-1.31B2-0.56C2。

表2 响应面设计与结果Table 2 Design and results of response surface experiment

表3 二次回归模型的方差分析结果Table 3 Analysis of variance for quadric regression model

注：*差异显著(P<0.05);**差异高度显著(P<0.01);***差异极显著(P<0.001)。

2.2.2 响应面试验结果及方差分析 由图2可以直观的看出料液比、提取温度和反应时间对竹叶多糖的提取的影响及各因素之间交互作用的显著程度。通过响应面曲面的坡度可以直接反映了因素发生变化时竹叶多糖得率的响应灵敏度,等高线图为椭圆形时说明两因素交互作用显著。由图2a1、图2b1、图2c1可知,料液比对多竹叶多糖的得率影响最为显著,料液比和反应温度对竹叶多糖的得率有较大的影响。由图2a2、图2b2、图2c2可知,料液比和提取温度以及超声温度和提取时间交互作用对竹叶多糖的得率影响显著。通过回归模型的分析,以竹叶多糖得率为评价指标,竹叶多糖适宜的提取工艺参数为超声功率300 W,磷钨酸质量分数4.50%,提取时间1.99 h、超声温度80.61 ℃、料液比1∶21.22 g/mL。在此条件下,模型预测竹叶多糖提取率为9.78%。考虑到实际应用过程中操作简单,将最佳工艺参数修正为超声功率300 W,磷钨酸质量分数4.50%,提取时间2 h、超声温度80 ℃、液料比1∶20 g/mL;在此条件下,竹叶多糖的提取率为9.89%,实际值与理论值基本相符,说明模型对竹叶多糖提取工艺条件参数优化可靠可行,具有一定的实用价值。

2.3 竹叶多糖结构表征

2.3.1 红外光谱分析 由图3可知,竹叶水溶性多糖在3413 cm-1有较强且较宽的吸收峰为O-H伸缩振动,位2924 cm-1附近的吸收峰为CH3或CH2的C-H收缩振动峰[32]。位于1635 cm-1附近的吸收峰是羧基的C=O非对称伸缩振动[33]。位于1462 cm-1附近的吸收峰为C-H的变角振动,位于1000～1300 cm-1附近的吸收峰为吡喃环的醚键(C-O-C)和羟基(C-O-H)的伸缩振动[34]。位于894 cm-1附近的吸收峰说明多糖含有β-糖苷键,位于817 cm-1附近的吸收峰为α-型吡喃糖的C-H弯曲振动[35]。综上所述,以上吸收峰的存在说明提取物具有多糖化合物的特征吸收峰。

图3 竹叶多糖的红外光谱Fig.3 FT-IR spectrum of bamboo leaves polysaccharides

图2 各因数对竹叶多糖得率影响的响应面图和等高线图Fig.2 Response surface map and contour map of the effect of various factors on the yield of bamboo leaves polysaccharides

图4 竹叶粉末和竹叶多糖SEM图(×5500)Fig.4 SEM images of bamboo leaf powder and polysaccharides(×5500)注:a:未处理的竹叶粉;b:提取后的竹叶粉;c:竹叶多糖;红色箭头标注:提取前后竹叶的微观变化。

2.3.2 竹叶多糖表面形貌分析 由图4a竹叶原料反应前的扫描电镜图观察到,未经处理的竹叶粉末表面形貌光滑、组织呈现出完整的块状、有少量的小碎片且形状不规则。由图4b超声波耦合磷钨酸提取后竹叶粉末扫描电镜图观察到,在超声波和磷钨酸共同作用后,竹叶粉末凹凸不平,带有孔洞的褶皱结构,从而将竹叶粉末的内容物释放出来,提高了竹叶多糖的提取率。图4c为竹叶多糖的扫描电镜图,通过对竹叶多糖的形貌特征的观察,多糖表面呈现块状和蜂窝状结构,表面结合较为紧密,呈现蜂窝状的原因可能是因为多糖分子链间形成细微的多孔结构,且蜂窝状表面较紧密、平整,表明多糖分子存在聚集体。

2.3.3 竹叶多糖单糖组成分析 将竹叶多糖水解得到的单糖与9种混合标准单糖的高效阴离子色谱图进行比对(图5和图6)可知,竹叶多糖由岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖组成,根据其峰面积计算6种单糖的摩尔比为0.32∶0.12∶1.75∶1.89∶1.22∶15.13。

图5 9种混合标准单糖衍生物的HPAEC图Fig.5 HPAEC for derivatives of9 standard monosaccharide mixture注:1:岩藻糖;2:鼠李糖;3:阿拉伯糖;4:半乳糖;5:葡萄糖;6:木糖;7:果糖;8:半乳糖醛酸;9:葡萄糖醛酸;图6同。

图6 竹叶多糖衍生物的HPAEC图Fig.6 HPAEC of derivatives ofbamboo leaves polysaccharide

2.4 竹叶多糖抗氧化活性能力

2.4.1 DPPH自由基清除能力 由图7可知,随着竹叶多糖质量浓度逐渐增加,其对DPPH自由基的清除率逐渐增大,当竹叶多糖质量浓度达到4.00 mg/mL时DPPH自由基清除率趋于稳定,其清除能力达到85.91%。在所测定的质量浓度范围内,竹叶多糖的DPPH自由基清除能力均明显低于相同质量浓度的VC。竹叶多糖与贾金霞等[36]研究的铜绿菇多糖抗氧化活性相比较,当多糖浓度达到4 mg/mL时,竹叶多糖DPPH自由基清除率为85.91%,铜绿菇多糖DPPH自由基清除率为38.97%,表明竹叶多糖可作为抗氧化剂良好来源。

图7 竹叶多糖DPPH自由基清除率Fig.7 Scavenging rate of DPPH freeradical of bamboo leaves polysaccharides

2.4.2 还原能力 竹叶多糖分子中含有醛基和羰基,可以通过自身的还原作用,清除自由基,还原能力越强,其抗氧化能力越强[37]。由图8可知,随着竹叶多糖的质量浓度逐渐增加,其还原力缓慢上升,当竹叶多糖质量浓度为7.00 mg/mL时,其还原力为0.569。在所测定的质量浓度范围内,竹叶多糖的还原力明显低于相同质量浓度的VC。与教小磐等[38]的甜茶叶多糖的还原力比较发现,竹叶多糖的还原能力优于甜茶叶多糖。

图8 竹叶多糖还原力Fig.8 Reducing power of bamboo leaves polysaccharides

2.4.3 ABTS+自由基清除能力 ABTS+被过硫酸钾氧化形成蓝绿色的稳定的ABTS+自由基,ABTS+自由基与抗氧化剂结合使之褪色,在734 nm波长下,测定其吸光度,比较样品抗氧化能力。由图9可知,随着竹叶多糖的质量浓度逐渐增加,其对ABTS+自由基清除率逐渐增大,当竹叶多糖质量浓度达到2.00 mg/mL后ABTS+自由基清除率趋于稳定,其清除率达99.23%。与许海棠等[39]研究的山豆根多糖比较发现,竹叶多糖和山豆根多糖在ABTS+自由基清除能力相当。表明竹叶多糖可作为抗氧化剂良好来源。

图9 竹叶多糖ABTS+自由基清除率Fig.9 Scavenging rate of ABTS+ freeradical of bamboo leaves polysaccharides

2.5 竹叶多糖对肿瘤细胞增殖抑制作用

图10 竹叶多糖对HepG2细胞体外增殖的影响Fig.10 Effect of bamboo leaf polysaccharide on thegrowth of HepG-2 cells in vitro

活细胞中的线粒体含有琥珀酸脱氢酶,它可以与MTT黄色溶液形成不可溶的蓝紫色甲瓒结晶,并沉积在细胞中;死细胞中不存在琥珀酸脱氢酶,不会出现紫色甲瓒结晶。根据此原理,测试了竹叶多糖对肝癌HepG-2细胞的抑制效果。由图10可知,竹叶多糖对HepG-2细胞的增殖显示出了较强的抑制作用,随着竹叶多糖质量浓度的增加,其对HepG-2细胞的增殖抑制率逐渐提高,说明抑制率与竹叶多糖的质量浓度有关。当竹叶多糖的质量浓度为4.00 mg/mL时,对HepG-2细胞的增殖抑制率达到半抑制浓度，抑制率为53.18%。综上可知,竹叶多糖具有一定的抗肿瘤活性。

由图11a观察到细胞贴壁生长,细胞之间紧密连接,细胞壁光滑,折光性好。由图11b～图11d经过竹叶多糖处理的细胞,随着多糖质量浓度的增加,细胞的结构和形态发生了明显的变化。由图11d观察到经过4.00 mg/mL的竹叶多糖处理的细胞,细胞核发生明显改变,部分细胞出现贴壁细胞数量减少、悬浮和凋亡小泡等明显的凋亡特征。

图11 竹叶多糖诱导HepG-2细胞凋亡的形态学观察Fig.11 Cell morphology of Hep G2 cells treatedwith bamboo leaf polysaccharides注:a:未处理正常细胞;b:0.25 mg/mL竹叶多糖处理的细胞;c:1.00 mg/mL竹叶多糖处理的细胞;d:4.00 mg/mL竹叶多糖处理的细胞;红色标记-死亡、凋亡的非正常细胞。

3 结论与讨论

研究利用超声波辅助杂多酸水解法对竹叶多糖进行提取,通过单因素和响应面试验对提取工艺进行优化,确定最佳工艺参数为:提取竹叶多糖最优条件为:超声温度80 ℃、提取时间2 h、料液比1∶20 g/mL、磷钨酸质量分数4.50%、超声功率300 W。此条件下,竹叶多糖的提取率为9.89%。与回归方程的预测值相近,具有一定的实用价值。采用高效阴离子色谱和傅里叶红外色谱对竹叶多糖结构进行了初步表征,为竹叶多糖结构的进一步研究和多糖的高值化利用提供实验依据。竹叶多糖对ABTS+和DPPH自由基有较好的清除能力,且与多糖的质量浓度成正相关,对ABTS自由基清除率在2.00 mg/mL接近100%,对DPPH自由基清除率在4.00 mg/mL达85.91%,具有良好的自由基清除能力。竹叶多糖质量浓度为4.00 mg/mL时对癌细胞HepG-2增殖的抑制率可达到半抑制浓度,说明竹叶多糖具有一定的抗肿瘤活性。