麻荆颗粒质量标准研究

孟硕 彭勍 张鹏 刘建勋

摘要 目的：建立麻荆颗粒的质量标准。方法：应用高效液相色谱法测定麻荆颗粒中麻黄碱、黄芩苷、甘草苷的含量，建立麻荆颗粒的高效液相指纹图谱。结果：盐酸麻黄碱在0.289 2～2.892 0 μg范围内呈良好的线性关系（r=0.999 9），黄芩苷在0.208 0～2.080 0 μg范围内呈良好的线性关系（r=0.999 9），甘草苷在0.192 0～1.920 0 μg范围内呈良好的线性关系（r=0.999 9）。初步建立了麻荆颗粒颗粒的高效液相色谱指纹图谱，相似度均在0.96以上，10批次样品中确定了12个共有峰，并指认其中5个共有峰。结论：本方法稳定、准确可靠，能有效的为麻荆颗粒质量控制提供依据。

关键词 麻荆颗粒;麻黄;黄芩;甘草;指纹图谱;高效液相;提取工艺;质量标准

Study on Quality Standard of Majing Granule

MENG Shuo，PENG Qiong，ZHANG Peng，LIU Jianxun

（Institute of Basic Medical Sciences of Xiyuan Hospital，China-Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing Key Laboratory of Chinese Materia Pharmacology，Beijing 100091，China）

Abstract Objective：To establish the quality standard of Majing Granule.Methods：The contents of ephedrine，baicalin and glycyrrhizic glycoside were measured by HPLC.The HPLC fingerprint of Majing Granules was established.Results：There was a good linear relationship of ephedrine hydrochloride in the range of 0.289 2～2.892 0 μg（r=0.999 9）.There was a good linear relationship of baicalin in the range of 0.208 0～2.080 0 μg（r=0.999 9）.There was a good linear relationship of liquiritin in the range of 0.192 0～1.920 0 μg（r=0.999 9）.The HPLC fingerprint of Majing granules was preliminarily established，and the similarity was above 0.96.A total of 12 common peaks were identified in 10 batches of samples，and 5 of them were identified.Conclusion：This method is stable，accurate and reliable，which can provide the basis for the quality control of Majing Granule.

Keywords Majing Granule; Herba Ephedrae; Radix Scutellariae; Radix Glycyrrhizae; Fingerprint; HPLC; Extraction process; Quality standard

中图分类号：R286;R283.6文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.05.012

麻荆颗粒由麻黄、黄芩、甘草和牡荆油四味[此处麻荆颗粒是四味中药，参见“《麻荆颗粒制备工艺与质量标准研究》（硕士论文）/孟硕/中国中医科学院/2016年”]中药组成，来源于临床验方，具有宣肺祛邪、清热化痰的功效，临床用来治疗感冒后咳嗽、慢性支气管炎等，经临床应用多年，疗效显著[1]。为了更好的对麻荆颗粒进行质量控制，提高该制剂安全性和有效性，我们分别建立了这前三味药材中的主要药效成分盐酸麻黄碱、黄芩苷、甘草苷的高效液相色谱含量测定方法[2]，并建立了麻荆颗粒高效液相指纹图谱控制模式，严格控制该制剂的质量[3-6]。实验结果表明本方法稳定有效、准确可靠，可为制定麻荆颗粒的质量标准做参照。

1 仪器与试药

1.1 仪器

KQ-300型超声清洗器（昆山超声仪器有限公司）;AE240型精密分析天平（Mettler）;LABOROTA4001旋转蒸发仪（Heidolph）;DZF-6050A型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）;Agilent 1200系列高效液相色谱仪。

1.2 试剂

盐酸麻黄碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：171241-200506）;麻黄对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121051-201005）;黄芩苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110715-201016）;黄芩对照药材（中国食品药品检定研究院，批號：120955-201309）;甘草酸铵对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110731-200615）;甲醇（色谱纯Fisher）;乙腈（色谱纯Fisher）;磷酸（色谱纯Fisher）;三乙胺（色谱纯Fisher）;水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 麻黄碱含量测定

2.1.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex Polar-RP80A（4.6 mm×150 mm，4 μm）;流动相：甲醇-0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（1.5∶98.5）[7];流速：1.0 mL/min;柱温：30 ℃;检测波长为210 nm，该色谱条件下，麻黄碱能与其他色谱峰达到基线分离。色谱图见图1。

2.1.2 对照品溶液的制备 取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成浓度为0.289 2 mg/mL的盐酸麻黄碱对照品溶液，备用。

2.1.3 供试品溶液的制备 取麻荆颗粒0.50 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加入水至刻度超声溶解，滤过，作为供试品溶液。精密称取不含麻黄的阴性对照制剂0.50 g，同法制成阴性对照溶液。

2.1.4 线性关系的考察 取盐酸麻黄碱对照品溶液，分别配制成浓度为28.92、57.84、115.68、173.52、231.36、289.20 μg/mL的溶液，进样10 μL，依据上述色谱条件测定，记录峰面积。根据回归分析绘制标准曲线，回归方程Y=20.552X-18.19（r=0.999 9），表明盐酸麻黄碱在0.289 2～2.892 0 μg范围线性关系良好。

2.1.5 精密度实验 取浓度为173.52 μg/mL的盐酸麻黄碱对照品溶液，连续进样6次，按上述色谱方法进行测定，RSD为0.31%。

2.1.6 重复性实验 取麻荆颗粒样品，按“2.1.3”项下方法制备6份样品溶液，用高效液相法进行含量测定测得平均含量为1.69 mg/g，RSD为1.10%。

2.1.7 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10 h进样10 μL，盐酸麻黄碱峰面积RSD为1.11%。

2.1.8 加样回收率实验 取同一批号的麻荆颗粒样品（含量为4.55 mg/g）6份，0.25 g/份，精密称定，分别加入1.140 8 mg盐酸麻黄碱对照品，依法制备样品溶液，并进行含量测定，计算回收率[8]。结果显示，盐酸麻黄碱的平均回收率为101.94%，RSD为0.71%。结果见表1。

2.1.9 样品含量测定 取3批麻荆颗粒样品，依据供试品溶液制备方法分别制成供试品溶液，高效液相色谱法测定样品中麻黄碱的含量，结果见表4。

2.2 黄芩苷的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Symmetry C18（3.9 mm×150 mm，3.5 μm）;流动相：甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）[9-10];流速：1.0 mL/min;检测波长为280 nm。该色谱条件下，黄芩苷能与其他色谱峰达到基线分离。色谱图见图2。

2.2.2 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为0.208 0 mg/mL的溶黄芩苷对照品溶液，备用。

2.2.3 供试品溶液的制备 取麻荊颗粒0.50 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加水至刻度，超声溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。精密称取不含黄芩的阴性对照制剂0.50 g，同法制成阴性对照溶液。

2.2.4 线性关系的考察 精密吸取黄芩苷对照品溶液，分别配成浓度为20.80、41.60、83.20、124.80、166.40、208.00 μg/mL的溶液，进样10 μL，依据上述色谱条件测定，记录峰面积。根据回归分析绘制标准曲线，回归方程Y=33.2X-37.863（r=0.999 9），表明黄芩苷在0.208 0～2.080 0 μg范围线性关系良好。

2.2.5 精密度实验 取黄芩苷对照品溶液，进样6次，高效液相法进行测定，结果RSD为0.23%。

2.2.6 重复性实验 取麻荆颗粒样品，按“2.2.3”项下方法制备6份样品溶液，用高效液相法进行含量测定，测得平均含量为17.40 mg/g，RSD为1.24%。

2.2.7 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10 h进样10 μL，黄芩苷峰面积RSD为1.003%。

2.2.8 加样回收率实验 取同一批次的麻荆颗粒样品（含量为58.9 mg/g）6份，每份0.025，精密称定，分别加入1.488 mg黄芩苷对照品，依法制备样品溶液，并进行含量测定，计算回收率。结果显示，黄芩苷的平均回收率为98.37%，RSD为2.22%。结果见表2。

2.2.9 样品含量测定 取3批麻荆颗粒样品，依据供试品溶液制备方法分别制成供试品溶液，用高效液相法测定黄芩苷的含量，结果见表4。

2.3 甘草苷含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Waters Symmetry C18（3.9 mm×150 mm，3.5 μm）;流动相：乙腈为流动相A，以0.05%磷酸为流动相B，梯度洗脱（0～8 min，19%A;8～35 min，19%～50%A;35～36 min，50%～100%A）[8];流速：1.0 mL/min;检测波长为237 nm。该色谱条件下，甘草苷能与其他色谱峰达到基线分离。色谱图见图6。

2.3.2 对照品溶液的制备 称取甘草苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成浓度为0.192 0 mg/mL的甘草苷对照品溶液，备用。

2.3.3 供试品溶液的制备 精密称取麻荆颗粒0.20 g，置25 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀使其充分溶解，滤过，取滤液作为供试品溶。精密称取不含甘草的阴性对照制剂0.20 g，同法制成阴性对照溶液。

2.3.4 线性关系的考察 精密吸取甘草苷对照品溶液，分别配成19.20，38.40，76.80，115.20，153.60，192.00 μg/mL的溶液，进样10 μL，依据上述色谱条件测定，记录峰面积。根据回归分析绘制标准曲线，回归方程Y=16.069X+14.99（r=0.999 9）。表明甘草苷在0.192 0～1.920 0 μg范围线性关系良好。

2.3.5 精密度实验 取浓度为41.60 μg/mL的甘草苷对照品溶液，连续进样6次，按上述色谱方法进行测定，RSD为0.61%。

2.3.6 重复性实验 取麻荆颗粒样品，按“2.3.3”项下方法制备6份样品溶液，进行高效液相含量测定，测得平均含量为2.56 mg/g，RSD为1.09%。

2.3.7 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10 h进样10 μL，甘草苷峰面积RSD为1.103%。

2.3.8 加样回收率实验 取同一批次的麻荆颗粒（含量为8.67 mg/g）6份，每份0.1 g，精密称定，分别加入0.765 mg甘草苷对照品，用高效液相进行含量测定，甘草苷的平均回收率为100.51%，RSD为1.71%，表明回收率的重复性良好。结果见表3。

2.3.9 样品含量测定 取3批麻荆颗粒样品，依据供试品溶液制备方法分别制成供试品溶液，进行高效液相测定并计算甘草苷的含量，结果见表4。

2.4 指纹图谱的建立

2.4.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex polar-RP80A（4.6×150 mm，4 μm）;以乙腈为流动相A，以0.5%磷酸水溶液为B，梯度洗脱;梯度洗脱（0～8 min，19%A;8～45 min，19%～50%A;45～46 min，50%～100%A;46～50 min，100%～19%A）检测波长为210 nm;柱温为25 ℃;流速为1.0 mL/min;进样量为10 μL。

2.4.2 混合对照品溶液的配制 精密称定甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、伪麻黄碱、甘草酸、麻黄碱对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.3 mg对照品的溶液，即得。

2.4.3 样品溶液的配制 取麻荆颗粒0.1克，精密称定置10 mL量瓶中，加水超声溶解，定容至刻度，即得。

2.4.4 指纹图谱的建立 取10批麻荆颗粒样品，按“2.4.3”项下方法制备样品溶液，进行高效液相测定，采用多点校正全谱峰匹配模式，共标定12个共有峰。见图4～5。并指认峰1为麻黄碱，峰2为伪麻黄碱，峰7为甘草苷，峰8为黄芩苷，峰12为甘草酸。

将10批指纹图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012版）软件，进行相似度评价。见表5。10批样品相似度均大于0.96，说明10批麻荆颗粒的质量稳定。

3 讨论

麻黄、黄芩和甘草是麻荆颗粒中三味主要药材，其中麻黄辛散苦泄，温通宣畅，入肺经，外开皮毛之郁闭，内降上逆之气，宣发肃降，善治咳喘，故为君药;黄芩苦寒，善清肺火及上焦实热，配麻黄宣肺泄热，平喘止咳;甘草，甘平，祛痰止咳，调和诸药[11]。

本研究对麻荆颗粒方中三味药材进行了高效液相含量测定。参考中华人民共和国药典以及文献[12-17]报道，HPLC含量测定选取君药麻黄的主要成分麻黄碱以及黄芩中的黄芩苷，甘草中甘草苷同时作为制剂含量测定的指标成分，以确保麻荆颗粒质量稳定可靠。本实验建立了麻荆颗粒的高效液相指纹图谱，系统地反映了其制剂化学成分的全貌，该图谱方法的建立[18-19]，可作为麻荆颗粒的质量控制方法。通过对麻荆颗粒顆粒的分析，共建立12个共有峰，其中指认5个峰分别为麻黄碱、伪麻黄碱、黄芩苷、甘草苷、甘草酸。

在溶剂选择过程中，分别采用水、甲醇作为溶剂对供试品进行了溶解，结果显示甲醇对供试品的溶解性较好，且在HPLC含量测定中，分离效果良好，杂质峰无干扰，故选用纯甲醇作为溶解溶剂。

麻荆颗粒由麻黄、黄芩、甘草和牡荆油四味药组成，制剂中的化学成分复杂多样。指纹图谱可快速直观的进行制剂的定性鉴别，专属性强;选择麻黄碱、黄芩苷、甘草苷作为HPLC含量测定的3个指标性成分，进行制剂的质量控制。以上2种方法相结合，为麻荆颗粒临床用药的安全性和合理性提供了科学依据。

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（2018-11-08收稿 责任编辑：苍宁）