子宫内膜样腺癌组织中PRRX1蛋白的表达及临床意义

郑 炎，曹立宇，肖大树，王相岩，李文清

子宫内膜样腺癌是起源于子宫内膜的恶性肿瘤[1]，流行病学资料显示发病率位于女性恶性肿瘤的第4位，占女性全身恶性肿瘤的7%[2]。由于子宫内膜样腺癌癌变过程比较漫长，因此寻找子宫内膜癌早期诊断的指标，延缓疾病的发展，提高患者的5年生存率具有一定的临床意义。大量研究显示配对相关同源框1(paired related homoeobox 1, PRRX1)蛋白在多种癌症的发病机制和诊断中发挥一定的作用[3-6]。目前，PRRX1在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义报道较少。本实验旨在初步探讨PRRX1在子宫内膜样腺癌中表达及其与临床病理特征的关系，以提高临床与病理医师的认识水平。

1 材料与方法

1.1 材料收集2010～2018年安徽医科大学第一附属医院以及安徽医科大学附属巢湖医院存档的267例子宫内膜组织标本。患者年龄40～78岁，平均54.2岁；其中正常子宫内膜86例，子宫内膜上皮内瘤变90例，子宫内膜样腺癌91例。纳入标准：(1)所有病例均进行病理学诊断，由两名检验医师对结果进行判读，以病理结果作为诊断依据；(2)有完整的病理资料和辅助检查资料。排除标准：(1)存在严重的心、肺、肝、肾功能异常病史；(2)患者在接受检查前，进行相关医学治疗(如放、化疗等)。根据FIGO分级、临床分期和有无淋巴结转移将子宫内膜样腺癌进行分类。

1.2 主要试剂与仪器PRRX1羊多克隆抗体(PAK001Hu01，Cloud-Clone公司)，柠檬酸盐抗原修复液(粉剂)(0.01 mol/L，pH 6.0，MVS-0066)，0.01 mol/L PBS(pH 7.2～7.4)，DAB显色试剂盒(Polymer，Kit-0015)和EliVision Polyer HRP(鼠/兔)Kit-9902免疫组化试剂盒，均购自福州迈新公司。普通微波炉用于抗原微波修复。

1.3 免疫组化采用免疫组化EliVision法染色，石蜡切片常规脱蜡、脱水，3%H2O2孵育20 min，PBS清洗，0.01 mol/L枸橼酸盐缓冲液中微波处理进行抗原修复，PBS清洗3次；滴加封闭血清孵育20 min，滴加一抗(PRRX1抗体)4 ℃孵育过夜，一抗工作浓度为1 ∶100，PBS清洗3次，滴加辣根过氧化物酶标记二抗，孵育20 min，PBS清洗3次；DAB溶液显色；自来水冲洗，苏木精复染脱水封固，镜下观察。PBS液代替一抗作阴性对照。结果判定根据细胞质或细胞核呈棕黄色颗粒染色的细胞数和染色强度判定阳性。选择至少5个400倍视野下计数，按阳性细胞占百分比计分：<5%为0分、5%～25%为1分、25%～50%为2分、50%～75%为3分、≥75%为4分；按细胞着色强度计分：弱染色为0分、中度染色为1分、强染色为3分。将两项得分结果相乘：总分<2分为阴性，≥2分为阳性。

1.4 统计学分析采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。采用χ2检验分析计数资料，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PRRX1蛋白在正常子宫内膜、子宫内膜上皮内瘤变和子宫内膜样腺癌中的表达应用免疫组化EliVision法检测正常子宫内膜、子宫内膜上皮内瘤变和子宫内膜样腺癌组织中PRRX1蛋白表达，结果显示PRRX1阳性信号定位于子宫内膜上皮内瘤变和子宫内膜样腺癌的细胞核中，在正常子宫内膜中未见PRRX1蛋白呈阳性，在子宫内膜上皮内瘤变中呈弱阳性，在子宫内膜样腺癌中呈强阳性 (图1～3)。

图1 PRRX1蛋白在正常子宫内膜中呈阴性，EliVision法

图2 PRRX1蛋白在子宫内膜上皮内瘤变中呈弱阳性，EliVision法

图3 PRRX1蛋白在子宫内膜样腺癌中呈强阳性，EliVision法

2.2 PRRX1蛋白在正常子宫内膜、子宫内膜上皮内瘤变和子宫内膜样腺癌中的表达PRRX1在91例子宫内膜样腺癌中的阳性率为79.1%(72/91)，在正常组织中的阳性率为0(0/86)，在子宫内膜上皮内瘤变中的阳性率为10.0%(9/90)。子宫内膜样腺癌与正常组织或子宫内膜上皮内瘤变组织相比，PRRX1的阳性率显著升高，差异有统计学意义(χ2=157.54，P<0.05)。

2.3 PRRX1表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系患者年龄≥60岁的子宫内膜样腺癌的PRRX1阳性率为86.2%，年龄<60岁的子宫内膜样腺癌的PRRX1阳性率为75.8%，两组差异无统计学意义(P>0.05)。按FIGO分级分类，FIGO 1级的PRRX1阳性率为60%，FIGO 2级的PRRX1阳性率为87.5%，FIGO 3级的PRRX1阳性率为89.6%，FIGO 1级组的PRRX1阳性率低于FIGO 2、3级组，差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期：Ⅰ+Ⅱ期PRRX1的阳性率为74%，Ⅲ+Ⅳ期阳性率为85.3%，两组差异无统计学意义(P>0.05)；无淋巴结转移组PRRX1阳性率为75.9%，有淋巴结转移组阳性率为87.8%，两组差异无统计学意义(P>0.05，表1)。

表1 子宫内膜样腺癌中PRRX1表达与临床病理特征的关系(%)

3 讨论

本实验观察PRRX1蛋白在正常子宫内膜及子宫内膜样腺癌组织中的表达，并探讨PRRX1与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系。结果显示PRRX1蛋白阳性主要存在于子宫内膜样腺癌中，定位于细胞核，少量阳性表达于子宫内膜上皮内瘤变中，正常子宫内膜多无阳性。另外，在子宫内膜样腺癌患者中，按FIGO标准进行分级，FIGO 1级的PRRX1阳性率低于中、低分化；按患者年龄、临床分期、有无淋巴结转移分类，PRRX1阳性率差异均无统计学意义。

PRRX1是定位于细胞核的同源框蛋白配对家族中的成员[6]，有研究显示在胆囊癌[7]、乳腺癌[8]、卵巢癌组织[9]中，其阳性颗粒均主要表达于细胞核中。本实验还发现PRRX1在子宫内膜腺癌中也表达于细胞核。PRRX1在癌组织中的高表达，在癌旁组织或正常组织中的低表达。方帆等[8]发现在乳腺癌中PRRX1阳性率高达45%；癌旁组织中的阳性率仅为12.5%。范丹等[9]报道则显示在62例卵巢癌组织中，PRRX1的阳性数为33例，阳性率达53.2%。本实验中有91例子宫内膜样腺癌中PRRX1的阳性率高达79.1%(72/91)；在正常组织中的阳性率为0(0/86)。另外，作为子宫内膜癌的癌前病变[10]，90例子宫内膜上皮内瘤变组织中有9例PRRX1阳性，提示PRRX1的表达上调可能在子宫内膜样腺癌的发生、发展过程中起一定作用，具体的作用机制尚需进一步的分析。

鉴于PRRX1在癌组织存在高表达现象，需进一步分析PRRX1的表达与肿瘤患者临床病理指标的相关性。卵巢癌中PRRX1的表达被认为与临床分期和有无转移密切相关[9]。乳腺癌中PRRX1阳性率被发现与有无淋巴结转移和临床分期存在关联，表现为淋巴结转移及Ⅲ+Ⅳ期乳腺癌患者的PRRX1阳性率显著高于无淋巴结转移及Ⅰ+Ⅱ期的乳腺癌患者[8]。本实验中并未见PRRX1的表达与患者年龄、临床分期、有无淋巴结转移等有关联。但是在FIGO分级中，FIGO 2级组织的PRRX1阳性率(87.5%)和FIGO 3级组织的PRRX1阳性率(89.6%)高于FIGO 1级组织(60.0%)。在不同肿瘤组织中，PRRX1的表达与分化或分级程度之间的联系有差异。在非小细胞肺癌组织中PRRX1高表达存在于高分化的肺癌组织中[11]，与本组结果相反。方帆等[8]发现PRRX1的阳性率与乳腺癌患者肿瘤分化程度均无显著性相关。在卵巢癌患者中PRRX1表达对肿瘤分化程度差异无统计学意义[9]。关于PRRX1在不同肿瘤组织中与分化程度之间联系的差异性机制，尚需进一步分析。

综上所述，尽管近年子宫内膜样腺癌在基因水平、环境因素、信号通路等方面取得较大成果[12]，但继续寻找新的生物学标志物依然十分重要，本实验发现PRRX1蛋白在子宫内膜样腺癌组织中存在高表达，提示其可能成为子宫内膜样腺癌辅助诊断分级的标志物。目前，PRRX1在子宫内膜样腺癌中的作用机制尚需进一步探讨。