胃癌中DAB2IP、Twist的表达及其临床意义

黄梦君，王向阳, 蔡 威

胃癌是常见的腹部恶性肿瘤，好发年龄为50岁以上，男女发病率为2 ∶1[1]，患者随饮食结构变化，发病年龄趋于年轻化。DAB2IP是新发现的抑癌基因，在肿瘤细胞的增殖、凋亡过程中发挥重要作用[2]。Twist是在上皮间充质转型过程中占重要位置的基本螺旋-环-螺旋转录因子，可促进肿瘤发生和转移，研究表明Twist在多种肿瘤中高表达[3]。本实验采用免疫组化SP法检测DAB2IP和Twist在胃癌及其癌旁正常组织中的表达，分析其与胃癌临床病理特征及预后的关系，并进行相关性分析，以期为胃癌诊断和治疗方法的选择提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 临床资料收集2014年8月～2015年6月湖北省武汉市中心医院诊治的52例胃癌标本，另选取距癌组织边缘>5 cm的对应癌旁正常组织作为对照。所有患者均经病理证实为胃癌，其中男性31例，女性21例，年龄49～70岁，平均(59.51±8.17)岁。收集患者临床病理资料，包括肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、组织分化程度、浸润深度等。按照国际抗癌联盟制定的分期标准[4]分为：Ⅰ期10例、Ⅱ期8例、Ⅲ期19例、Ⅳ期15例；高分化12例、中分化10例、低分化30例。纳入标准：(1)胃癌患者均经手术病理证实；(2)术前未进行放、化疗及激素治疗；(3)病灶无明显坏死区。排除标准：(1)自身免疫性疾病；(2)具有明显炎症细胞浸润癌旁正常组织；(3)合并其他恶性肿瘤；(4)临床资料不完整。实验经本院伦理委员会批准，所有研究对象对本实验同意并签署知情同意书。

1.2 免疫组化按照免疫组化法对胃癌组织及其癌旁正常组织进行染色，经冲洗、复染、脱水、封片，置于光镜下进行观察。在高倍镜下每个切片中选取5个视野，随机挑选并对阳性染色细胞数量进行统计。

1.3 结果判断(1)按阳性细胞的染色强度计分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；(2)按阳性细胞所占百分比计分：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。将两项得分结果相乘：≤3分为阴性，>3分为阳性。

1.4 随访术后通过电话访问、门诊复查的方式，对所有患者进行3年随访，并统计总生存时间与中位生存时间。

2 结果

2.1 胃癌及癌旁正常组织中DAB2IP与Twist蛋白的表达免疫组化结果显示DAB2IP蛋白阳性产物位于细胞核，Twist蛋白阳性产物定位于细胞质(图1)。与癌旁正常组织相比，胃癌中DAB2IP阳性率降低,Twist阳性率升高，差异有统计学意义(P<0.05,表1)。

2.2 DAB2IP、Twist表达与胃癌临床病理特征的关系DAB2IP、Twist表达与患者年龄、肿瘤大小均无关(P>0.05)；DAB2IP蛋白在有淋巴结转移、浸润深度为T3+T4、病理分期Ⅲ+Ⅳ期、分化程度低胃癌组织中阳性率显著低于无淋巴结转移、浸润深度T1+T2、病理分期Ⅰ+Ⅱ期、分化程度中+高度患者(P<0.05)。Twist蛋白在有淋巴结转移、浸润深度为T3+T4、病理分期Ⅲ+Ⅳ期、分化程度低胃癌组织中阳性率显著高于无淋巴结转移、浸润深度T1+T2、病理分期Ⅰ+Ⅱ期、分化程度中+高度患者(P<0.05，表2)。

表1 胃癌及癌旁正常组织中DAB2IP、Twist的表达

图1 A. DAB2IP在癌旁正常组织中呈阳性，SP法；B. DAB2IP在胃癌组织中呈阴性，SP法；C.Twist在癌旁正常组织中呈阴性，SP法；D.Twist在胃癌组织中呈阳性，SP法

表2 DAB2IP、Twist表达与胃癌临床病理特征的关系

2.3 胃癌中DAB2IP、Twist表达的相关性DAB2IP、Twist在胃癌组织中共同阳性率为19.2%(12/52)，共同阴性率为44%(23/52)。Spearman相关性分析结果显示，胃癌组织中DAB2IP与Twist表达呈负相关(r=-0.820，P<0.05，表3)。

表3 胃癌组织中DAB2IP、Twist表达的相关性

2.4 胃癌中DAB2IP、Twist表达与预后的关系Kaplan-Meier法分析显示，DAB2IP阳性组3年总生存率及中位生存时间远高于阴性组[(71.4%vs34.2%)、(28.93vs22.42)个月])。Twist阴性患者3年内总生存率及中位生存时间高于阳性患者[(58.8%vs28.6%)、(25.12vs19.86)个月，图2]。

图2 A.胃癌患者DAB2IP表达的生存分析；B. 胃癌患者Twist表达的生存分析

3 讨论

近年随着饮食结构改变、工作压力的增大，胃癌患者发病逐渐呈年轻化趋势。胃癌早期症状与胃炎、胃溃疡等类似，易被忽略。DAB2IP已被证实属于肿瘤抑制基因，有研究表明DAB2IP在肝癌患者中表达异常[5]。肿瘤的侵袭转移是恶性肿瘤不良预后的重要原因，而上皮细胞-间质转化在肿瘤侵袭转移过程中发挥重要作用。研究表明Twist可诱导上皮-间质转化的发生，且有研究显示，Twist在胃癌中异常表达[6]。因此，本实验观察胃癌组织及其癌旁组织中DAB2IP和Twist蛋白表达，并分析其与临床病理特征及预后的关系。

人DAB2IP基因定位于9q33.1～9q33.3。DAB2IP由2002年Chen等在酵母双杂交实验中首次发现，表明DAB2IP通过与DAB2/DOC2的N端结合，作为DAB2信号通路的下游效应分子。DAB2/DOC2是一种在丝裂原信号转导途径中起连接作用的蛋白，在抑制肿瘤细胞生长方面具有重要意义[7]。Shen等[8]研究表明，DAB2IP在胃癌组织中低表达，敲除DAB2IP后胃癌细胞的体外生长与转移能力增强。本实验结果显示胃癌组DAB2IP蛋白阳性率显著低于癌旁正常组织，提示DAB2IP表达与胃癌的发生密切相关。观察DAB2IP与临床病特征的关系，结果显示：DAB2IP与淋巴结转移、临床分期、组织分化程度、浸润深度均有关，与高、中分化的癌组织相比，低分化组织DAB2IP阳性相对较低，与Ⅰ+Ⅱ期患者相比，Ⅲ+Ⅳ期患者DAB2IP的阳性率显著降低，说明DAB2IP表达与胃癌的发生、发展紧密相关。Kaplan-Meier法分析显示DAB2IP阳性组总生存率显著高于阴性组，提示DAB2IP表达与胃癌患者的不良预后密切相关。

Twist在多种恶性肿瘤中均有高水平的表达，如小叶性乳腺癌、前列腺癌、肝细胞癌以及结直肠癌[9-12]。研究表明转录因子Twist可诱导上皮细胞-间质转化的发生，正常生理状态下Twist处于“沉默”状态，当发生癌症时被激活[13]。Twist的高表达导致E-cadherin介导的细胞黏附丢失、使间充质标志物活化，并增强细胞的侵袭和迁移能力，促进胃癌的浸润与转移[14]。Tao等[15]发现在胃癌组织中Twist的高表达与肿瘤的侵袭能力及患者的预后有显著相关性。本实验结果显示，胃癌组织中Twist蛋白阳性率显著高于癌旁正常组织，提示Twist与胃癌的发生密切相关。临床病理特征的关系研究表明，Twist与淋巴结转移、临床分期、浸润深度均显著相关，与严慧等在胃癌中的结果一致。Xu等通过细胞学研究证实Twist在具有低分化细胞株MKN45细胞内呈高表达，而在人胃癌高分化细胞株MKN28细胞内表达水平则较低，提示Twist可能与细胞的分化程度及转移潜能密切相关。本实验也表明低分化时，胃癌组阳性率显著高于癌旁正常组织。Kaplan-Meier法分析显示Twist阴性组总生存率显著高于阳性组，提示Twist阳性不利于胃癌患者的预后。同时Spearman分析表明DAB2IP、Twist在胃癌组织呈负相关，结合两者与临床因素中的表达，推测胃癌的发生、发展可能是DAB2IP降低和Twist升高的共同作用结果，但两者之间的具体机制还有待进一步分析。

综上所述，胃癌组织中DAB2IP阳性率下降，Twist阳性率升高，DAB2IP、Twist与胃癌的发生、发展及预后密切相关。但本实验也存在一定不足，其具体机制尚需进一步探讨。