两性霉素B补料分批发酵工艺优化

王 昂，王耀耀，仲伟潭，张雪霞，任志红，李 敏

(微生物药物国家工程研究中心，河北省工业微生物代谢工程技术研究中心，华北制药集团新药研究开发有限责任公司，河北 石家庄 052165)

两性霉素B是结节性链霉菌菌株经发酵产生的次级代谢产物，是由37个碳原子构成的多烯大环内酯类抗生素[1]。临床用于治疗深部真菌如白色念珠菌、新型隐球菌、曲霉菌等引起的全身性感染[2]。两性霉素B的生物合成途径为PKSI，包括活化前体(乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A)的生成、内酯环的形成(多聚乙酰途径)和氨基糖的形成，其中，内酯环的形成是限制性因素。内酯环的形成是以乙酸为起始单位、丙二酸为延续单位，通过聚酮体途径缩合而成。两性霉素B生物合成的重要前体物质是短链脂肪酸，而由菌体自身代谢产生的脂肪酸不易被菌体的生物合成利用，因此需要添加外源性短链脂肪酸类前体物质[3-6]。为大幅提高产两性霉素B菌株的发酵产抗水平，作者对添加外源性短链脂肪酸类前体物质的两性霉素B补料分批发酵工艺进行优化，并在生产罐上进行工艺验证[7-8]。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

结节性链霉菌，由华北制药集团新药研究开发有限责任公司菌保中心提供。

乙酸钠、丙酸钠、丁酸钠、乙醇、正丙醇、正丁醇等均为试剂级，天津永大试剂公司；玉米淀粉、葡萄糖、热榨黄豆饼粉、酵母粉、玉米浆、氯化钠、碳酸钙、磷酸二氢钾等均为工业级。

摇床培养箱，高压蒸汽灭菌锅，生化培养箱，超净工作台，台式离心机，光学显微镜，pH计，15 L、50 L全自动发酵罐(上海国强生物公司)，15 t两性霉素B生产罐。……