吻合器痔上粘膜环切术病理切片制作体会

付秀妹

（安徽省芜湖市第五人民医院病理科，安徽 芜湖 241000）

内痔、外痔和混合痔是痔疮常见的三种类型，主要根据肛门处的齿状线来进行区分。内痔位于齿状线以内，常覆盖有直肠粘膜上皮组织；外痔位于齿状线以外，或突出于肛门外，常覆盖有鳞状上皮或移行上皮，伴出血性溃疡以及急性慢性炎症；混合痔是指齿状线上下方均有痔核突出，并联成一体。痔疮被国家中医药管理局列为肛肠科16种难治病之一并需手术治疗。由于混合痔组织由直肠黏膜和肛管皮肤所组成，结构致密、质地坚韧，多伴有坏死、出血等。想要获得良好的切片，结果就需要从固定样本开始，选择合理的脱水、透明、浸蜡时间，并做好其他步骤的精细操作，这样才能有助于提高切片的制作质量，现介绍如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集芜湖市第五人民医院医院2012年1月～12月患者送检的吻合器痔上粘膜环切术标本15例，其中男性8例，女性7例，年龄32～79岁，平均年龄46.9岁，包括10例环状混合痔，5例混合痔。

1.2 方法

1.2.1 取材：方法按常规进行，但混合痔组织块大小应尽量不超过1.5×1×0.2 cm。取材时务必细心剔除组织里的吻合器钉子，否则切片时钉子会损坏切片刀，出现严重刀痕。

1.2.2 脱水：脱水方法按常规进行，由低浓度向高难度乙醇逐步梯度脱水，必须温和缓慢，不可操之过急，保证乙醇渗透完全。

1.2.3 透明：常规用二甲苯更换两次共透明60分钟，使二甲苯充分浸入组织蛋白中。

1.2.4 浸蜡：由于患者的混合痔中包含一定的皮肤正常组织，其结构较为紧密，采用常规包埋剂（蜡），很难完全进入患者组织内，所以需要先选择熔点为（56～58℃）的石蜡Ⅰ，浸蜡60 min，再换至（熔点58～60℃）的石蜡Ⅱ中浸蜡60 min。浸蜡时延长时间，能够使石蜡充分进入患者的组织，并在组织内均匀渗入，从而保证制成的蜡快具有良好的硬度和均匀度，有助于切片的完整。

1.2.5 包埋：包埋用熔点60℃的硬蜡，比熔点高1～2℃，包埋时要注意蜡的温度不可过高烫坏组织或使组织变硬变脆。

1.2.6 制片：切片厚度最好控制在4 μm较为合适，我们多次摸索分析，发现刀刃与组织切面的倾角以5度较好，同时应该将上皮部分置于上方最后切，切片时先修切组织，暴露最大的切面后用冰块直接冷敷降温，切片刀应锋利，按粘膜层至鳞状上皮层的顺序切片，可以轻松完整的切出切片；或者将上皮部分垂直于切片刀的方向放置，最大限度减少切片的皱折产生，同样可以顺利完整的切片；切片经30%的酒精初展后，再用载玻片捞起放入展片箱。

1.2.7 染色：染色采用苏木精伊红染色法（HE）[3]，对于皮下纤维丰富的混合痔组织，且常伴有严重角化现象，所以在进行伊红染色时，其时间应当在一定程度上缩短，如果染色时间较长，有可能会影响细胞核的染色，但如果选择苏木素进行染色，其时间可以进行一定的延长，避免细胞核内结构染色效果较差。

2 结 果

上述方法制成的切片组织结构完整、色彩深浅适度、红蓝对比鲜明，鳞状上皮着色层次明显，腺上皮色调柔和悦目。特别是核内结构清晰透澈、颜色鲜艳、核浆对比鲜明，切片质量优于常规制片，得到满意结果，详见图1。

3 讨 论

由于混合痔位于齿状线上下，而且表面覆盖着直肠黏膜和肛管皮肤，如果痔疮发展到最后阶段，就会成为环状混合痔围绕而直肠肛管一周。手术的治疗方法是缩短治愈时间同时，又要保护肛门的正常功能。

由于肛管结构特殊，对人们的日常生活有着非常重要的意义，而在柔软的乙状结肠镜或结肠镜检查时，因为内窥镜迅速滑过肛管进入宽而长的直肠，可能漏掉提示肿瘤病变的肛门粘膜结构的细微改变[4]。因此做好混合痔组织制片是保证临床病理组织诊断的重要内容，这也对于患者后续临床诊断来说有积极的意义。由于混合制组织结构较为特殊，其较为紧密和坚韧，并且部分患者在发病后会出现坏死和出血等症状，如果采用常规制片方案则难以获得良好的组织样本，所以在一定程度上改善混合制切片质量对于病理检查来说有积极意义，也是对病理技术的客观要求和挑战。

本文从取材开始即限定标本的大小厚薄，固定和脱水以及浸蜡，切片直至染色，每一步都严格要求，这样就使切片变得容易完整切出，红蓝颜色比例协调，鳞状上皮分层着色明显，腺上皮色调柔和悦目。核内结构清晰透澈，颜色鲜艳，核浆对比染色鲜明。因此该经验是在制作含有皮肤组织及其它较硬的疑难病理组织切片时可以借鉴和运用，在日常病理制片过程中有推广应用的价值。