不同影响因素下大白猪精子活力和保存时间的研究

胡国娟

（白银市白银区兽医局，甘肃 白银 793900）

目前，规模化繁育场均采用人工授精的方式进行配种，更加高效、快捷。大型养殖场都建立了自给的公猪站，提供给繁育场用于配种。精液在采集、检测、稀释、分装、保存、运输过程等，因为操作不合理，而降低精液品质。因此，提高养猪产业链上各个环节显得尤为重要。

研究发现，反映精液品质的因素主要有精子活力和保存时间两个方面，而提高精子活力和保存时间也受到了众多因素的影响。研究人员普遍认为公猪的遗传因素、年龄、日粮、环境、管理及疾病等因素是影响公猪精液品质好坏的重要因素[1]。本文通过对精液的采集、称量、稀释、检测精子活力和密度以及封装保存的方法，搜集了有关稀释度、采精频率、保存温度等相关因素的数据，对比分析了大白猪精子活力和保存时间的影响，为建立最佳的精子保存方法提供参考。

1 影响精液品质的因素

1.1 稀释度

人工授精采取的精液不会立刻投入使用，考虑到受精概率，稀释后的精液一方面可以防止浪费，另一方面也有助于提高母猪受孕率。不稀释的精液，因为在精液中副性腺分泌物的浓度高，加入稀释液后副性腺分泌物得到稀释，因而巩固了原生质膜，同时稀释液还供给精子充分的营养物质，提供缓冲剂，保持精液适当的pH值，为较长期保存和长途运输提供了便利[2]。

精液是通过一定量的稀释粉与蒸馏水配比后使用，稀释粉的品质也会对精液产生影响。经过一定比例稀释后，可以使每次采取的精液发挥最大效用，不仅可以用于多头母猪的配种，也可以降低种猪淘汰率。

1.2 采精频率

小公猪训练成功后，每隔5 d采精一次，成年公猪每隔2 d即可采精。精子从精原干细胞到生成具有受精能力的成熟精子大约需要42 d才能完成，采精频率过高，其品质差、密度小、活力低；采精频率过低，精子会在附睾内大量积压，使得采集的精液精子活力较差，畸形率高，同时精子产生的大量活性氧（ROS）与精子质膜发生脂质过氧化反应，造成精子质膜损伤，精子活率下降，不适合配种[3]。

经过对比研究发现，采精频率在一定范围限度内时，对种猪的影响最小，淘汰率也最低，精液品质也相对较好。采精次数太少，会导致精液在附睾中积压过多，影响精子质量；同时，采精次数过多不仅会影响种猪性欲，也会由于附睾产精子供应不足，采集的精液大多为精清。

1.3 保存方法

截至目前，将猪精液常温保存3d以上而保持良好受精率的稀释液配方尚未取较好的结果[4]。研究发现，猪精液最适合常温保存，在15～25℃ 的温度下，由于微生物生长迅速而影响精液质量，使得精液的保存时间和成活率都不高[5]。当精子处于休眠状态时，活力较稳定，从而可以延长保存时间。

1.4 其他因素

本实验全部采用3～4月份1～2岁的大白猪，因此不考虑种公猪品种以及年龄、季节的影响。不同品种的种公猪其精液密度会因其遗传特性有所差异，而种公猪的精液密度与总产仔数、初生窝重、窝产活子数有很强的正相关关系[6]。对于不同使用年限的公猪，采集的精液质量也是不同的。刚开始进行驯化、诱情的小公猪不仅采精量少，而且精液质量也相对较差。一般来讲，投入生产1～2年左右的种公猪生产的精液品质是最好的。达到一定年限，将会按照种公猪淘汰规则定期淘汰不能继续生产的种公猪。

严格执行操作流程，保持干净无菌的环境，可以有效地避免精液污染。因此公猪站的建立也是按照SPF 标准建立的。

公猪的饲养环境条件要求很高，湿度不宜太大，一般控制在65%左右。公猪对于热的应激远远大于冷应激；温度范围在18～22 ℃ 可以使公猪感到舒适。公猪舍在冬天温度应该在15 ℃以上，夏天在30 ℃ 以内，超过或低于相应限度均会影响公猪的诱情，降低公猪性欲，从而影响精液质量。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 精液的采集 试验猪来自于白银区武川乡李家猪场1～2岁大白种公猪。一般采用徒手采精法，将经过驯化的公猪挤出尿液后引至假母台，通过母猪尿液或公猪精液对其诱情，引发公猪性欲，待公猪阴茎呈螺旋状抽动，用手卡在阴茎头部，然后用保温杯接取精液即可。此过程必须保证采精环境和工具经过消毒灭菌。然后将比较浓稠的部分收集保存，经过过滤处理后保存于保温杯中，放入实验室进行检测。尽量选择色泽光鲜，气味正常，活力达到 80%以上的精液进行对比研究。不同的采精技术对结果有影响，因此只选择同一采精员采集的精液作为实验材料。

2.1.2 仪器设备 可调精液保存箱、恒温水浴锅、电子显微镜（400倍）、37 ℃ 保温板、精液封装机、离心管、恒温磁力加热搅拌器

2.2 方法

2.2.1 不同稀释度对精子活力和保存时间的影响 按每500 g稀释粉与1 000 ml蒸馏水的比例配置成稀释液，放置在搅拌器上搅拌15 min后，静置15 min，二次搅拌15 min后再静置15 min，然后与原精混合。

用离心管将静置后的稀释液与原精按1:1、1:3、1:6、1:9、1:12的比例混合，每日静置于37℃的保温板上分别镜检一次（镜检后存于可调精液保存箱中，每次镜检前均需在恒温水浴锅中加热），根据镜检结果计算精子活力，记录活力大小，观察是否有死精已经精液的粘连程度，判断精子畸形率。

精子的活力是指原精液在37℃ 下呈直线运动的精子占全部精子总数的百分率[7]。因此，镜检时需要将精液放在保温板上，使精液温度达到37 ℃。

2.2.2 采精频率对精子活力的影响 白银区武川乡李家猪场存栏种猪有35头，可以采精的种猪有19头，在达到采精标准的种猪中随机抽取9头，分别观察记录一个月内正常采精次数下采精量的多少，检测精子活力大小，记录对应耳牌号、采精日期、采精量、活力比、密度、采精员。对采精量、活力比、密度求均值进行对比。凡能参加人工授精采精的公猪，每3 d采精1次，完全能满足周边母猪配种的需要[8]。在精液需求量不是过多的情况下，采精次数应该保持在一定限度内。

2.2.3 不同常温保存方法对精子活力的影响 精液保存技术通过降低或抑制精子的新陈代谢强度从而达到延长精子在体外存活时间的目的[9]。将配制好的同一种猪同比例精液（本实验中用1:9）等量分成6份置于离心管中，放在 37 ℃ 保温板上，将6份精液分次放入可调精液保存箱中储存1 h ，温度分别调为15 ℃、17 ℃、19 ℃、21 ℃、23 ℃、25 ℃，连续观察5 d，记录观察精子活力变化。

3 结果与分析

3.1 不同稀释度与精子活力和保存时间的关系

不同比例稀释液下精子活力变化差异显著，也间接影响其畸形率，表1为不同稀释度下精子活力大小，畸形变化和保存时间的关系对比。从表1可以看出在1:1、1:3、1:6条件下，第五天时精子基本失去活力。第四天时通过精子的粘连程度来看，此时精子畸形率最高，不宜使用。而在1：9和1:12条件下，精子保持较高活力状态的保存时间可以达到第五天且畸形率低。就对比结果看，精子在1:9条件下品质最佳。

表1 不同稀释度与精子活力和保存时间的关系

表2 采精频率与精子活力的关系

3.2 采精频率与精子活力的关系

针对所选种猪，将采精量、活力比以及密度求均值后进行比较。表2为同一品系大白猪在4月份不同采精次数采精量均值和活力比均值的对比。

从表2可以看出采精次数在5～6次的种猪采精量相对普遍较高，且活力比也较为稳定。就对比结果来看，一头种猪一个月内的采精次数需在5～6次，过少或过多的采精频率均会影响精子活力，降低精液品质。

3.3 不同保存温度与精子活力的关系

为制作更高品质的精液，将温度范围精确到单个温度值波动范围内。表3连续观察记录了不同温度下精子活力大小的变化关系。

表3 不同保存温度与精子活力的关系

从表3可以看出，精液储存在略低的温度下可以延长精子的存活期，而在17 ℃ 下精子活力最为稳定，基本处于休眠状态，在植入母猪子宫内时由于温差受到的应激反应最低。因此，可以选用17 ℃ 精液保存箱保存，以提高精液质量。

4 总结

影响精液质量的因素还有很多，除了上述的公猪年龄、季节、稀释液对精液质量的影响外，影响精液质量的因素还有饲养管理、营养水平、采精操作、保存运输等[10]。综合考虑影响精液品质的不同因素，能够大范围影响精液品质的因素主要有配比稀释液的浓度、月均每头猪的采精频率和保存时间及温度的控制。

一是原精液与稀释液的配制比例应该控制在1:9左右，可以有效维持精子活力，降低畸形率。二是每头可正常生产的大白猪每月采精频率应控制在5～6次，可以维持公猪良好的生产状态，延长使用期限。三是精液保存温度应控制在17℃，尽量保证随产随用，减少储精积压，保证精液活力。四是建立与现代人工受精技术相匹配的SPF公猪站。SPF 公猪站的建立、精液采集的自动化、更加完善的精液评估、精液分装方便安全、自动输精和子宫深部输精等技术在生产中的应用，使人工授精技术在生产中的应用逐步提高和完善[11]。