耐除草剂玉米MON87427 定性PCR 检测方法的建立

吴博泽，刘 璇，郭俊佩，许冬梅，袁建琴，高建华，史宗勇

（山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801）

2018 年全球转基因作物种植面积1.917 亿hm2，其中，转基因玉米约占30%[1]。转基因生物技术诞生以来，生物安全问题相伴而生，不同国家和地区采取各具特色的转基因生物安全管理制度，以确保人类、植物、动物、微生物和生态环境安全[2]。我国采取积极的应对措施，制订了一系列法律法规对其进行严格管理。为实现有效监管，必须对相应的转基因生物及其产品建立精准检测方法。目前，转基因产品检测方法主要集中在核酸检测和蛋白质检测2 个方面[3]。其中，核酸检测主要针对外源插入序列中的特殊元件或者插入序列附近的特征序列。通常，转化体特异性检测的靶标主要是外源插入序列与靶标物质基因组连接区域的DNA 序列。这种方法具有高度的专一性，是转化体特异性检测的首选方法[4]。

在众多转基因作物中，耐除草剂性状的转化体推广面积最广，比如，2018 年，耐除草剂性状转基因作物约占全球转基因作物推广面积的46%。目前主要的耐除草剂基因是epsps 和bar。耐除草剂玉米MON87427 是孟山都公司研发的耐草甘膦的转基因品系，插入的外源序列包含一个根瘤农杆菌（Agrobacterium tumefaciens CP4）epsps 基因的表达框[5]。该基因编码一种5- 烯醇式丙酮酰- 莽草酸-3- 磷酸合成酶（5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synt hase，EPSPS），该酶对除草剂草甘膦表现出极高的耐受性，常被用作转基因耐草甘膦性状的筛选标记[6-9]。在MON87427 中，该基因由花椰菜花叶病毒CaMV 35S 启动子和NOS 终止子调控表达。……