miR-34b/c基因rs4938723的单核苷酸多态性与少精症的相关性研究

柯红利，阿周存

（1.大理大学基础医学院，云南大理 671000；2.大理大学农学与生物科学学院，云南大理 671003）

精子发生是一个十分复杂的过程，涉及众多相关基因的时空表达调控。相关基因的表达调控异常会引起生精异常，导致生精障碍，如无精症、少精症等〔1〕。微小RNA（MicroRNAs，miRNAs）通过与靶基因的mRNA结合并沉默靶基因，参与基因的转录后调控〔2〕，而转录后调控是精子发生过程基因表达调控的重要方式，是正常生精不可或缺的〔3〕。有研究显示，miRNA在精子发生过程中发挥重要作用，其异常可能导致生精障碍〔4〕。然而，具体哪些miRNA与生精障碍有关还不完全清楚。

近年来，在小鼠模型中的研究显示，miR-34b/c是小鼠正常生精所必需的miRNA，其异常与小鼠的生精障碍相关〔5〕。这提示miR-34b/c基因也可能与人类生精障碍相关，但目前缺乏相应研究资料。鉴于此，本研究在汉族人群中，对miR-34b/c基因的常见单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点rs4938723的多态性与少精症的相关性进行研究，初步探索miR-34b/c基因与少精症的关系。

1 材料与方法

1.1研究对象病例组由273个少精症患者组成，来自于四川大学华西医院和大理大学第一附属医院，根据WHO（世界卫生组织）指南诊断为少精症的男性（精子密度小于15×106个/mL）。对照组包括234个精子密度正常的男性。所有研究对象均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1 PCR扩增 用TIANamp Genomic DNA Kit试剂盒，从研究对象的外周血中提取基因组DNA。SNPrs4938723的PCR扩增引物序列为：5'-CTCTGGGAACCTTCTTTGACCCAT-3'和 5'-TGAGATCAAGGCCATACCATTCAAGA-3'，扩增片段的长度为147 bp。PCR扩增反应的体积为25μL，反应的条件为：94℃预变性5 min，随后进行35个循环（94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸40 s），最后72℃延伸5 min。……