Berthelot比色法测定γ-氨基丁酸含量的实验条件优化

闫朝阳，李 旭，马钰柯，金凯旋，王元秀

(济南大学 生物科学与技术学院，山东 济南 250022)

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)是一种天然的非蛋白质氨基酸，广泛存在于动、植物和微生物中[1]。在哺乳动物体内，GABA作为重要的抑制性神经递质[2]，参与多种代谢活动，具有多种功效[3-4]，因此与之相关的研究成果很多。

GABA的检测方法主要有高效液相色谱(HPLC)法、Berthelot比色法、纸电泳法、纸层析法、氨基酸分析法等[5-10]。国家标准中规定的GABA检测方法是HPLC法，主要是利用邻苯二甲醛与GABA发生柱前衍生反应，再利用紫外反相HPLC来测定GABA的含量。HPLC法的检测精度、准确度都很高，但检测过程繁琐、费时，不适合大批量GABA样品的检测[11-12]。Berthelot比色法是利用苯酚(C6H5OH)和次氯酸钠(NaClO)与GABA的游离氨发生显色反应来检测GABA的含量，检测的灵敏度较高，简单易行，可快速检测大批量GABA样品[13-14]。相比之下，纸电泳法、纸层析法测定GABA含量的准确度太低[15-17]，氨基酸分析法与HPLC法优、缺点类似[18-19]，所以，Berthelot比色法是检测GABA含量最方便、快捷、易操作的方法[20-21]。李秀娟等[22]对Berthelot比色法中苯酚、次氯酸钠的用量进行了优化，但未对加热温度、沸水浴时间、冰浴时间等因素进行研究。赵国群等[23]尝试建立一种快速测定GABA浓度的方法，利用乙醛酸、琥珀酸和溴甲酚绿能够与GABA的游离氨发生显色反应的原理，制成了由不同浓度的乙醛酸、琥珀酸、溴甲酚绿组成的混合显色剂，在波长为617 nm处检测GABA的浓度，但所使用的显色剂毒性很大，且检测精度较低。本文中通过显色剂的组成含量、加热时间、加热温度、冰浴时间的单因素与响应面实验优化Berthelot比色法，并将优化后的Berthelot比色法测定结果与HPLC法的测定结果进行t检验，比较二者数据的差异性。……