宁乡猪GADD45G基因多态性研究

曾勇波，马海明

(1 宁乡市动物疫病预防控制中心，湖南 宁乡 410600；2 湖南农业大学动物科学技术学院，湖南 长沙 410128)

哺乳动物的生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45(Growth Arrest and DNA Damage Inducible Gamma 45，GADD45G)是一类重要的信号换能器，并参与调节细胞的多种功能。GADD45G基因在人类基因去甲基化方面研究较多，但该基因在猪上的研究极少。鉴于国内外对猪GADD45G基因的研究甚少，我们开展了宁乡猪GADD45G基因分子遗传特性研究，以便为揭示GADD45G基因对猪肉质性状的研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 样品采集

选择325头大白猪和67头宁乡猪，采集猪耳小块组织样本，随后提取DNA。

1.2 PCR扩增条件

正向引物为5＇-AAA CTT GCT GCT TGC G-3＇；反向引物为5＇-GGA TGG AGG CGA CAC T-3＇。

1.2.1 PCR反应体系(总体积20 μL)

10×Buffer 2 μL，2 mmol/L dNTPs 1.6 μL，20 mmol/L MgCl21.6 μL，TaqDNA聚合酶 (5 U/μL)0.4 μL，DNA模板(100 ng/μL)1 μL，上下游引物(10 pmol/μL)各0.4 μL，双蒸蒸馏水(dd H2O) 12.6 μL。

1.2.2 PCR反应程序

94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸50 s，共35个循环；72 ℃后延伸8 min，最后4 ℃保存。

1.3 PCR产物Pst I酶切

在10 μL PCR产物中加入0.8 μL 10×内切酶缓冲液、0.2 μL限制性内切酶和1 μL双蒸蒸馏水，总体积为12 μL，37 ℃消化4 h～10 h。

A/G位点用2%琼脂糖凝胶电泳分析，5 V/cm电压电泳0.5 h(图1)，扩增片断为第1外显子至第2外显子，共804 bp，为PCR-RFLP-PstI分子标记。

2 结果与分析

在扩增的804 bp的片断中，GADD45G基因的PstI的酶切位点A/G位点存在3种基因型：AA型(804 bp)、AG型(164 bp+640 bp+804 bp)和GG型(164 bp+640 bp)。对GADD45G基因A/G位点的基因频率和基因型频率进行检测，PCR-RFLPPstI多态性的分布情况如表1所示，宁乡猪GADD45G基因A/G位点均存在AA基因型、GG基因型以及AG基因型，AG基因型频率较高，基因频率分别为0.08、0.73和0.19；A基因和G基因的频率分别为0.45和0.55，A/G位点的基因型大部分处于杂合状态。

3 讨论与结论

经卡方检验，宁乡猪GADD45G基因A/G位点处于哈代-温伯格平衡状态，表明本研究结果可靠。本研究为宁乡猪的保种和系统选育奠定了理论基础。