石榴皮鞣质对前列腺癌细胞侵袭转移影响的研究

潘正波，张海涛，蔡海荣，胡恩平，刘 晟

0 引言

前列腺癌是泌尿生殖系中常见的肿瘤，近年来，亚洲前列腺癌的发病率及死亡率逐年升高[1]。目前，根据前列腺癌的分期，前列腺癌的治疗主要包括根治性切除术、内分泌治疗、放化疗等[2]。石榴皮为石榴科石榴属植物石榴(PunicagranatumL)的干燥果皮，鞣质为石榴皮的主要活性成分。研究表明，鞣质类成分具有较好的抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤活性[3-4]。

本研究以前列腺癌PC-3细胞为研究对象，研究石榴皮鞣质对前列腺癌PC-3细胞侵袭性的影响及相关机制。

1 材料与方法

1.1 细胞培养

1.1.1 PC-3细胞复苏 细胞株：人前列腺癌PC-3细胞，由中国典型培养物保藏中心提供。从液氮罐中取出细胞复苏时应注意避免损伤细胞。

1.1.2 PC-3细胞培养 传代收集及计数:将细胞培养瓶放置在显微镜下,观察细胞消化并进行计数，计数细胞悬液的密度。细胞密度计数=(4个大格细胞总数/4)×104个/ml。

1.2 实验分组及石榴皮鞣质处理 将正常条件下培养细胞的PC-3分为4组，第1组为未加石榴皮鞣质的空白对照组(对照组)，第2组加石榴皮鞣质25 μg/ml，第3组加石榴皮鞣质50 μg/ml，第4组加石榴皮鞣质100 μg/ml。

1.3 划痕愈合实验检测石榴皮鞣质对PC-3细胞运动性的影响 将6×105个处于对数生长期的细胞均匀平铺到无菌6孔培养板中培养。当细胞覆盖率达到90%时进行划痕愈合实验。用10 μl Tip头在培养皿中轻轻地快速划两条平行直线，注意不要用力过大以免划伤底部，然后用磷酸盐缓冲液清洗细胞3次，将6孔培养板放于倒置显微镜下观察并拍照，24 h再次观察并拍照。……