海南某三甲医院多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM表达及与耐药表型的关系研究

王生成，杨祚明，蔡潇阳，张素领，王晓峰

0 引言

铜绿假单胞菌(Paeudomonasaeruginosa，Pa)属于非发酵菌假单胞菌属，是医院内常见的条件致病菌之一，在呼吸科和ICU感染率高，常感染免疫力低下患者[1-5]。Pa对多种抗生素产生耐药作用，给临床治疗带来极大的挑战，其临床分离率仅次于大肠埃希菌[6]。Pa的耐药机制复杂，外排泵系统在耐药机制中发挥重要作用，目前发现的有7种外排泵系统。虽然目前研究者对外排泵系统的功能尚不完全清楚，但是已经认识到外排泵对Pa耐药性的重要作用。有报道，外排泵可能通过将药物泵出菌体外发挥耐药作用[7]。研究发现，海南西部地区Pa的感染率较高，且其中4个外排系统MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM受到多种危险因素的调控[8-9]。由于检测难度较大，我们参考上述文献报道[8-9]对MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM 4个主动外排系统的表达情况及调控机制进行研究，以期为临床治疗提供思路和理论依据。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 选取2016年9月至2018年10月儋州市人民医院微生物培养室分离的Pa 54株，菌株均经法国生物-梅里埃公司所产的VITEK全自动微生物分析系统(BioMerieux)鉴定，其中多重耐药(对2种或者2种以上抗生素耐药)菌株36株，全部敏感菌株18株。参考菌株铜绿假单胞菌ATCC27853、大肠埃希菌ATCC25922，对照株Pa01，MexAB-OprM过度表达株CR1，MexXY过度表达株N135。

1.2 试剂和仪器 MH琼脂购自青岛海博生物技术有限公司，外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺(Phe-Arg-β-naph，PA βN)购自Sigma公司，抗菌药物美罗培南购自日本盐义制药株式会社，其余13种抗菌药物均购自中国药品生物制品检定所；TRIzol试剂盒、RNA反……