灯盏花素对缺氧/复氧诱导的皮质神经元凋亡的影响

赵中华，张桃桃，王 慧

0 引言

大脑缺血时诱发氧化应激反应，释放脂质过氧化产物、谷氨酸、兴奋性氨基酸及炎性因子，加重脑组织损伤[1-2]。神经细胞损伤后不可逆，因此，尽快恢复脑组织血流、保证脑组织氧供对神经元突触的重塑及存活有着重要意义。灯盏花素(Scutellarin)是临床常用的脑保护剂，具有减轻组织水肿、改善微循环、抗氧化、扩张血管的作用[3-4]。

缺血性脑卒中是一个复杂的病理生理过程，涉及神经细胞凋亡、氧化应激、炎症反应等多个环节。Bcl-2蛋白属膜整合蛋白，能够阻止细胞色素C从线粒体释放到细胞质，从而抑制细胞凋亡。Bax是重要的促细胞凋亡基因之一，其过度表达可拮抗Bcl-2的保护效应而使细胞趋于死亡。本实验采用缺氧/复氧模式模拟在体脑缺血再灌注损伤，以原代培养的大鼠皮质神经元为研究对象，研究灯盏花素对神经元的保护作用及机制，为其临床应用提供科学的实验资料。

1 材料与方法

1.1 材料 灯盏花素(美国Sigma公司，纯度>99%)，DMEM培养基(北京索莱宝科技有限公司)，CCK-8试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)，LDH、SOD、MDA试剂盒(南京建成生物试剂公司)，2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2′,7′-dichlorodi hydrofluorescein diacetate，H2DCFDA)荧光探针(美国BD公司)，FITC Annexin V凋亡检测试剂盒(美国BD公司)，Bcl-2及Bax抗体(上海碧云天公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 取出生24 h内SD大鼠，置于培养皿中，无菌条件下取大脑皮层，快速剪碎后置于含0.125%胰蛋白酶的PBS液中，37 ℃消化15 min，制备细胞悬液，1 000 r/min离心5 min，弃上清液后将细胞接种于塑料培养瓶中，37 ℃、5% CO2的培养箱中培养，3～5 d换液1次。

1.2.2 缺氧复氧模型的建立及细胞分组 共分4组，每组5个复孔。①……