1株致禽霍乱多杀性巴氏杆菌的病原学与分子生物学鉴定

李伟杰，祁鑫，田野，岂晓鑫，蒋桃珍*

(1. 中国兽医药品监察所，北京 100081；2. 北京市兽药监察所，北京 102629)

禽霍乱(fowl cholera)是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida)引起的多种禽类的出血性败血症，是危害我国养禽业的重要细菌性传染病之一，鸡、鸭和鹅等都有易感性[1]。病禽、康复禽或健康带菌禽是本病的主要传染源，禽霍乱造成鸡的死亡损失通常发生于产蛋鸡群。本文采用细菌分离培养、16S rDNA、Biolog、荚膜分型多重PCR、脂多糖多重PCR、动物试验等方法对湖南某鸡场病死鸡体内分离的1株菌株G-2进行了病原学和分子生物学系统鉴定。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料

无菌采集湖南某鸡场病死鸡的肝、脾和心血等，置4 ℃冰箱待检。

1.1.2 菌种

试验参考菌株多杀性巴氏杆菌CVCC 390，荚膜A型，由中国兽医微生物菌种保藏管理中心提供。

1.1.3 培养基和试剂

胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)购自OXOID公司，马丁肉汤购自北京中海生物科技有限公司，BUG培养基购自美国Biolog公司，马血清购自Gibco公司，革兰染色液试剂盒购自Solarbio公司，PCR相关试剂、琼脂糖购自宝生物工程(大连)有限公司。

1.1.4 实验动物

78和114日龄SPF鸡购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株的分离及纯化

按照农业行业标准NY/T 541-2016[2]，无菌采集死亡鸡的肝、脾和心血，将病料少许接种于TSB中，37 ℃培养16～24 h，用一次性接种环挑取培养物划线接种含5%鸡血清的TSA培养基，37 ℃培养16～24 h，挑取单个菌落进行纯化培养。

1.2.2 菌株的培养及观察

菌株划线接种含5%鸡血清的TSA培养基，37 ℃培养24 h，进行菌落形态及培养特性观察，用一次性接种环蘸取少量培养物进行革兰染色，观察染色特性及菌体形态。……