甲醇乙腈复合流动相在农药残留领域研究进展

盛建军 罗 建 罗少辉

(1.江西省环境保护科学研究院，江西 南昌 330039；2.江西省化学工业研究所，江西 南昌 330029)

1 引言

复合流动相对于高效液相色谱分析领域具有非常重要的意义，把甲醇和乙腈作为流动相的各种杂乱无章的检测标准统一起来，以此解决高效液相色谱中许多疑难杂症，并能极大提高检测效率和节约成本。

2 为什么要用甲醇乙腈复合流动相

2.1 在实际检测工作中，我们会同时收到大量样品和各种检测标准，标准制定者往往没有考虑到一线检测人员需要频繁更换流动相，导致工作量巨大。统一用甲醇-乙腈复合流动相能够大大减轻一线检测人员的负担，统一流动方法对一线检测人员就有重大的帮助意义。

2.2 根据我们现有甲醇乙腈复合流动相的实验成果，再通过大量试验数据证明其普遍性、通用性后，许多国标和企标检测方法将得到修正、补充和参考，对于分析化学领域和标准制定领域来说是具有非常重要的意义。

3 研究内容和目标

3.1 研究内容

3.1.1 通过对甲醇和乙腈的物理化学性质的深入研究，其中包括液体运动黏度、核电荷数、分子大小、溶解热、分子极性等，以此反向研究甲醇乙腈复合流动相特殊性。

3.1.2 使用复合流动相方法，采用最简单、基本的高效液相色谱仪对几种农药混合标样进行特殊的梯度法定性定量分析，建立针对该仪器各组分色谱图出峰时间和DAD图谱库。

3.1.3 为进一步确认该方法的普遍性，我们对标样(样品)都用复合流动相法和国标法(行业、企业标准法)两种方法进行试验，且将试验数据和计算结果进行了对比，在后面研究方法中我们都将会列出详细图谱和试验数据。

3.2 研究目标

3.2.1 通过研究复合有机流动相在实际检测中缩短检测时间，提高检测效率，节约流动相成本，将出峰异常率降到最低，免去了摸索各种适合条件的时间。

3.2.2 用梯度分析法改变流动相比率和检测波长，建立多种农药出峰时间和特异性曲线(DAD)数据库，以此运用于农药残留。

3.2.3 将复合流动相理论推广至分析检测其他应用领域如：化工生产、食品药品监督、保健品、生物化学研究、医药学、病理学研究等。

4 研究方法和技术路线

4.1 经参考大量文献，根据研究甲醇乙腈极性及大量实验数据，本项目统一有机流动相标准为A(甲醇：乙腈=1：1)，甲醇大致相当89%乙腈洗脱能力，故以此比例换算纯甲醇或纯乙腈作为有机流动相检测标准。

4.2 选出典型几种常用农药进行试验。产品名录如下：吡蚜酮、噻呋酰胺、嘧菌酯、己唑醇。

4.3 用复合有机流动相分析法对上述农药混合标样进行分析，建立各组分出峰时间表和DAD数据库。

4.5 通过试验数据来证明甲醇乙腈复合有机流动相液相色谱分离法的准确性。

5 试验部分

5.1 试验条件：Agilent1200高效液相色谱仪；色谱柱：250X4.6mm(i.d.)不锈钢柱(内装Tc-C18填料)；流速1mL/min；进样体积20μL。

5.2 在用企业标准检混配悬浮剂时出现了噻呋酰胺鼓峰问题，经试验用复合有机流动相方法将问题解决，并且提高了检测精密度。图1为企业标准噻呋·己唑醇典型色谱图，图2为本项目通用有机流动相检测法典型色谱图，可以看出图2修正了图1色谱图鼓峰情况。

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不锈钢柱，流速1mL/min，检测波长225nm，进样体积20μL，噻呋酰胺溶度约0.1g/L甲醇溶液，己唑醇溶度约0.03g/L甲醇溶液)

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不锈钢柱，流速1mL/min，检测波长225nm，进样体积20μL，噻呋酰胺溶度约0.1g/L甲醇溶液，己唑醇溶度约0.03g/L甲醇溶液)

5.3 在用国标法甲醇流动相检测噻虫·吡蚜酮时，操作条件：吡蚜酮出现鬼峰，采用甲醇乙腈复合有机流动相后成功解决了鬼峰情况，并且有效的将噻虫嗪和吡蚜酮分离，计算结果在控制标准范围内。如图3为国标法检测出吡蚜酮鬼峰色谱图，图4为吡蚜酮正常出峰典型色谱。

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不锈钢柱，流速1mL/min，检测波长265nm，进样体积20μL，噻虫嗪和吡蚜酮溶度均约0.1g/L乙腈水混合溶液)

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不锈钢柱，流速1mL/min，检测波长265nm，进样体积20μL，噻虫嗪和吡蚜酮溶度均约0.1g/L乙腈水混合溶液)

5.4 在检测25%嘧菌酯水分散粒剂时候，我们发现用HG/T 4931-2016《嘧菌酯水分散粒剂》检测出一杂峰并拖尾，最后我们使用甲醇乙腈复合有机流动相法将其分离，所得结果比直接采用行标法计算结果更为精准 。图5为国标法嘧菌酯典型色谱图，图6为甲醇乙腈复合有机流动相典型色谱，可以看出图6成功将图5种的拖尾峰分离出来。

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不锈钢柱，流速1mL/min，检测波长254nm，进样体积20μL，嘧菌酯约0.1g/L乙腈水混合溶液)

(Agilent 1200 HPLC，Agilent Tc-C18不锈钢柱，流速1mL/min，检测波长254nm，进样体积20μL，嘧菌酯约0.1g/L乙腈水混合溶液)

5.6 对嘧菌酯、噻虫·吡蚜酮、噻呋·己唑醇三种农药样品用国标法、企标法进行检测的时间与本项目通用有机流动相检测时间进行对比，最终统计出国标企标法12小时左右，通用有机流动相方法6小时左右，其中国标法和企标法消耗的大量时间集中在更换流动相时洗柱时间，还有噻虫·吡蚜酮条件不适合，摸索条件浪费了大量时间。由此可知我们本次试验的复合有机流动相，提高了检测效率是显而易见的。

6 结论

甲醇乙腈复合有机流动相对国标(行标、企标)起了修正、参考、补充作用；该方法能大大提高检测效率和降低检测成本，用在复杂组分梯度法定性时，还能降低了检测门槛，可用高效液相色谱仪替代质谱仪。