二氢杨梅素对肝纤维化小鼠肝功能的影响

张新卓 邬小兰 刘芸

摘要：试验旨在研究二氢杨梅素对肝纤维化小鼠肝功能的影响。试验选取小白鼠54只，随机分成空白组、模型组、扶正化瘀胶囊阳性对照组，二氢杨梅素低剂量组、二氢杨梅素中剂量组、二氢杨梅素高剂量组，测试不同剂量二氢杨梅素对肝纤维化小鼠肝功能的影响。结果表明：二氢杨梅素能缓解四氯化碳导致的肝损伤，低剂量二氢杨梅素对于ALT较佳，高剂量二氢杨梅素对于AsT较佳;二氢杨梅素能够在一定程度缓解肝细胞纤维化，但是并不能完全防止肝纤维化。二氢杨梅素可以调节肝功能，能明细降低ALT、AST的水平，有显著的保肝护肝功效，同时，二氢杨梅素对于肝纤维化有一定的疗效。

关键词：二氢杨梅素;肝纤维化;小鼠;护肝

藤茶是一种广泛分布于我国南部山区的药食两用植物。几百年来一直作为中草药和保健茶饮在民间使用。据《中草药汇编》等记载，藤茶具有祛风湿、清热解毒的功效，可用于治疗风热感冒、咽喉肿痛等。现代研究发现，藤茶中含有丰富的黄酮类化合物，含量高达37.4%～38.5%。二氢杨梅素是藤茶的主要化合物，也是天然黄酮类化合物的重要代表之一。二氫杨梅素具有抑菌作用、抑制癌细胞增殖作用等，特别是在保肝护肝方面有较好的效果，能缓解治疗各种原因引起的肝损伤。肝纤维化是潜在可逆的创伤愈合反应，可由慢性肝损伤引起，包括病毒性肝炎，酒精性肝炎、自身免疫性肝炎。主要以损伤的肝组织内和周围的细胞外基质的过度沉积为主要特征。本文以昆明小白鼠为实验对象，检测二氢杨梅素对肝纤维化小鼠肝功能。

一、材料与方法

（一）药品试剂

二氢杨梅素，民族中兽药分离纯化技术国家地方联合工程研究中心中兽药有效成分提取分离纯化与评价技术研究室制备，HPLC检测，纯度>98%。

扶正化瘀胶囊，上海黄海制药有限责任公司。

谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶（AsT）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所，透明质酸（HA），层粘连蛋白（LN），IV型胶原（CIV），III型前胶原（PC-III）放射免疫试剂盒，北京北方生物技术研究所。

其他试剂购自当地药材市场，分析纯。

（二）试验动物

健康雄性昆明种小白鼠54只，购自贵州医科大学实验动物中心。

（三）分组设计及饲养管理

健康雄性昆明种小白鼠54只，民族中兽药分离纯化技术国家地方联合工程研究中心中兽药药理毒理研究（实验）室喂养7天后（体重20g左右），将小鼠随机分成6组，每组9只，分别为1组（空白组）、2组（模型组）、3组（扶正化瘀胶囊阳性对照组），4组（二氢杨梅素低剂量组）、5组（二氢杨梅素中剂量组）、6组（二氢杨梅素高剂量组），每一组内设3个平行，每一个平行小鼠3只。控制饲养环境温度26℃，湿度控制在40%～60%，定时观察各组实验小鼠的日常状况。

（四）饲养配方及剂量

基础饲料，购自北京华越洋生物科技有限公司。

1组，按基础饲料正常喂养。

2—6组，在正常喂养基础饲料的情况下，每周间隔定时喂养三次混有40%四氯化碳油剂饲料（40%四氯化碳油剂，四氯化碳和花生油4：6体积混合），饲喂量：0.8mL/组。其中3组基础饲料混入扶正化瘀胶囊内含物，4-6组基础饲料混入二氢杨梅素，剂量见表1。给药方式为：每天早晚各定量喂食一次，自由饮水。

（五）指标测试

饲养50d后，眼眶取血，制备血清（血液静置30 min，4℃下3800r/min离心20 min得）。根据试剂盒说明操作，使用试剂盒测试血液中的ALT，AST，HA，LN，CIV，PC-III含量。

（六）数据分析

采用SPASS 20.0对数据进行分析统计。

二、结果与分析

（一）二氢杨梅素对小鼠ALT、AST的影响

血清ALT、AST含量的高低能反映出肝脏受损程度，含量越高，证明肝细胞受损越严重。

二氢杨梅素对小鼠血清ALT、AST的影响见图1。由图1可知，2组（模型组）ALT、AST分别为21.75 IU/L、258-21IU/L，与1组（空白组）相比，均极显著性增加，说明喂食含四氯化碳的饮食，小鼠的肝脏受到损伤，导致血清中ALT、AST含量增加。3组（阳性对照组）的ALT、AST分别为6.75 IU/L、124.55 IU/L，与1组（空白组）相比，有上升，但是对比2组，则极显著性下降，说明3组的阳性对照起作用，4组、5组、6组三个二氢杨梅素的低中高计量组，表现与3组阳性对照组一致，说明二氢杨梅素能缓解四氯化碳导致的肝损伤，具体来看，对于ALT，低剂量表现较佳，对于AST，则二氢杨梅素剂量越高，效果越好。

（二）二氢杨梅素对小鼠血清中HA含量的影响

肝脏受损，特别是肝细胞成纤维化，导致肝细胞不能及时摄取透明质酸（HA），从而导致血液中HA含量升高，检测血清中HA的含量可以看出肝纤维化程度。

二氢杨梅素对小鼠血清中HA含量的影响见图2。由图2可知，1组（空白组）血清中HA含量为108.56 ng/mL时，2组（模型组）为215.63 ng/mL，有极显著性差异，3组（阳性对照组），4-6组（实验组）血清中HA含量与2组相比，均显著性下降，但与1组相比，则显著性增多，说明3—6组能够在一定程度缓解肝细胞纤维化，但是并不能完全防止肝纤维化。

（三）二氢杨梅素对小鼠血清中LN含量的影响

LN是一类胶原蛋白，是基底膜的成分，如肝脏受损，肝脏合成LN增加，且LN含量随着肝纤维化进展而变化，肝纤维化越严重，LN含量越高，通过检测血清中LN的含量，可以间接看出肝纤维化的程度。

二氢杨梅素对小鼠血清中HA含量的影响见图3。由图3可知，1组（空白组）血清中LN含量为28.25 ng/mL时，2组（模型组）为67.45 ng/mL，有极显著性差异，说明四氯化碳导致了小鼠肝纤维化，造成血清中LN含量增加。3组（阳性对照组）的LN含量为36.24 ng/mL，与1组相比，有显著性增加，与2组相比，则极显著性降低，说明阳性对照组扶正化瘀胶囊可以减缓由四氯化碳引起的肝纤维化，但是并不能完全消除，4-6组（实验组）血清中LN含量与2组相比，均显著性下降，与3组阳性对照组基本持平，起到了阳性对照组类似的功效。

（四）二氢杨梅素对小鼠血清中CIV含量的影响

CIV是基底膜骨的胶原成分，主要在肝脏合成和分解，如果肝细胞受损纤维化，肝脏会过量合成C1V，从而使血液中CIV异常增多，血液中CIV含量的高低与肝细胞是否纤维化密切相关，监测血液中CIV的含量，可以反应出肝纤维化程度。

二氢杨梅素对小鼠血清中CIV含量的影响见图4。通过四氯化碳小鼠诱导肝纤维化，2组（模型组）的CIV含量达到152.12ng/mL，远远超过1组（空白组）的41.23 ng，mL。3组（阳性对照组）的CIV含量为65.25 ng/mL，与1组相比，有显著性增加，与2组相比，则极显著性降低，说明阳性对照组扶正化瘀胶囊可以减缓由四氯化碳引起的肝纤维化，但是并不能完全消除，4-6组（实验组）血清中CIV含量与2组相比，均显著性下降，与3组阳性对照组基本持平，起到了与阳性对照组类似的功效。

（五）二氢杨梅素对小鼠血清中PC-III含量的影响

PC-III肝细胞纤维化呈正相关，监测血液中PC-III的含量，可以反应出肝纤维化程度。

二氢杨梅素对小鼠血清中Pc-III含量的影响见图5。通过四氯化碳小鼠诱导肝纤维化，2组（模型组）的PC-III含量达到124.24g/mL，远远超过1组（空白组）的60.55 ng，mL。3组（阳性对照组）的CIV含量为65.05 ng/mL，与1组相比，有显著性增加，与2组相比，则极显著性降低，说明阳性对照组扶正化瘀胶囊可以减缓由四氯化碳引起的肝纤维化，但是并不能完全消除，4-6组（实验组）血清中PC-III含量与2组相比，均显著性下降，与3组阳性对照组基本持平，起到了阳性对照组类似的功效。

三、结论

二氢杨梅素可以调节肝功能，能明显降低ALT、AST的水平，本研究结果显示，藤茶双氢杨梅素可显著降低肝纤维化小鼠血清AST、ALT活性及血清中HA、LN、CIV、Pc-III含量。同时，二氢杨梅素有显著的保肝护肝功效，对于肝纤维化有一定的疗效。综上所述，双氢杨梅素对四氯化碳所诱导的小鼠肝纤维化有显著的干预作用，其作用机制将在以后的研究中体现。