羊胎盘冻干粉片对小鼠免疫的影响

董淑芸　张世洋

[摘要]目的 探讨羊胎盘冻干粉片对小鼠的免疫调节作用。 方法 将200只KM小鼠随机分为5个免疫组，每个免疫群组40只。设羊胎盘冻干粉片低、中、高剂量组分别为[0.3、0.6、1.8g/（kg·BW）]和阴性对照组，每组10只动物。 按0.2 ml/100g的体积经口给予小鼠灌胃，每天灌胃1次，连续灌胃30天后，进行各项免疫指标的测定。 结果 羊胎盘冻干粉片剂量组与阴性对照组比较能促进小鼠脾淋巴细胞增殖、转化作用（P<0.05），促进小鼠的迟发型变态反应（P<0.05），促进小鼠的抗体生成细胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平（P<0.05），增强小鼠的单核-巨噬细胞吞噬能力（P<0.05），对小鼠NK细胞活性则无明显影响（P>0.05）。结论 羊胎盘冻干粉片具有增强小鼠免疫力功能的作用。

[关键词] 羊胎盘冻干粉;枸杞子提取物;维生素C;小鼠;免疫、NK

羊胎盘是由羊的子宫粘膜和尿囊绒毛膜发生联系所形成，它是在母羊孕育胎儿时，胎儿血液和母体进行养分交换的组织。胎盘中含有多种活性物质以及丰富的营养成分[1]。徐桂花[2-3]等对羊胎盘进行化学成分分离提取后进行定量分析发现，羊胎盘中具有高含量的谷氨酸，约占氨基酸总量的16.07%，精氨酸约占氨基酸总量的13.988% 除谷氨酸，精氨酸外，还含有14种常见氨基酸，其中8种为必需氨基酸，约占氨基酸总量的33.50%。文献论证[4-5]谷氨酸，精氨酸可有效的促进细胞免疫功能，体液免疫功能.

枸杞子甘，性平。主要归肝、肾、肺经。为滋阴助阳，益精补血之良药。其化学成分主要含胡萝卜素、硫胺素、核黄素、烟酸、抗坏血酸、β-谷甾醇、及微量元素等。现代医学通过大量药理实验和临床实验明，枸杞其主要活性成份枸杞多糖（Lycicum barbarum polysaccbarides，LBP）具有显著增强免疫功能[6-7]、保肝功能，抗衰老功能及抗疲勞等药理作用[8]。

维生素 C（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又叫 L-抗坏血酸，是人体必需的微量营养元素之一，它具有抗氧化、参与合成胶原蛋白、治疗和预防坏血病、预防动脉硬化、治疗贫血、防癌等多种生理学功能。除此之外，维生素C还能促进机体内抗体的形成，提高白细胞的吞噬能力和对疾病的抵抗力以及对寒冷的耐受力，从而增强机体的免疫功能[9-10]。

本实验通过灌胃小鼠方式，观察羊胎盘冻干粉片对小鼠免疫调节作用。羊胎盘冻干粉片由羊胎盘冻干粉、枸杞子提取物和维生素C原料制成。

材料与方法

1.1 受试物 实验室自制，以羊胎盘冻干粉、枸杞子提取物、维生素C原料制成。每片含羊胎盘冻干粉片250mg、枸杞子提取物30mg、维生素C 10mg，规格0.6g/片。推荐成人每日口服6片。

1.2 动物 采用健康清洁级KM种小鼠200只，雄性，体重18～22g，SPF级，广西医科大学实验动物中心提供。

1.3 主要仪器与试剂 酶标仪、电子分析天平、二氧化碳培养箱、半自动生化分析仪、显微镜等。MTT、RPMI1640培养液、、绵羊红细胞、等。

1.4分组及剂量 先将动物随机分组，每40只小鼠为1个免疫组，共5个免疫组。每个免疫群组设羊胎盘冻干粉片低、中、高剂量组分别为[0.3、0.6、1.8g/（kg·BW）]和阴性对照组，每组10只小鼠。动物灌胃按0.2ml/100g体积给予，对照组给予等体积纯水。每天灌胃1次，连续灌胃30d。

1.5 实验方法 采用MTT法检测ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力和耳肿胀法检测迟发型变态反应两项细胞免疫功能检测;采用Jerne改良玻片法检测抗体生成细胞数和血凝法检测血清溶血素水平两项体液免疫功能检测;采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）和小鼠碳廓清实验两项单核-巨噬细胞吞噬功能检测;NK细胞活性检测采用乳酸脱氢酶测定法。

1.6 统计学方法 采用SPSS 17.0 统计软件对数据进行方差分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 受试物对小鼠体重和脏器/体重比值的影响 受试物各剂量组的小鼠末期体重、体重增重、胸腺/体重及脾脏/体重比值与阴性对照组间比较，差异均无统计学意义（P>0.05），提示受试物对小鼠的体重增长和免疫器官重量无明显影响。

2.2 受试物对小鼠细胞免疫的影响 小鼠脾淋巴细胞转化能力实验中，中剂量组的增殖能力[（Dλ）差值]与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。迟发型变态反应实验中，中、高剂量组的左右耳片重量差值与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。

2.3 受试物对小鼠体液免疫的影响 抗体生成细胞数检测中，中、高剂量组的溶血空斑数与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。血清溶血素水平检测中，中、高剂量组的溶血素抗体积数与阴性对照组比较，差异有统计学意（P<0.05）。（表1）

2.4 受试物对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响 吞噬鸡红细胞实验中，各剂量组小鼠的腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数均高于阴性对照组，其中高剂量组的吞噬百分率和吞噬指数与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。小鼠碳廓清实验中，低、中剂量组的碳廓清吞噬指数与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）（表2）。

2.5 受试物对小鼠 NK 细胞活性的影响 受试物各剂量组的NK细胞活性高于阴性对照组，但差异均无统计学意义（P>0.05）（表2）。

3讨论

本实验结果显示，羊胎盘冻干粉片剂量组与阴性对照组比较能促进小鼠脾淋巴细胞增殖、转化作用（P<0.05），促进小鼠的迟发型变态反应（P<0.05），促进小鼠的抗体生成细胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平（P<0.05），增强小鼠的单核-巨噬细胞吞噬能力（P<0.05），对小鼠NK细胞活性则无明显影响（P>0.05）。表明羊胎盘冻干粉片具有增强小鼠免疫力的作用。

引用文献：

廖俊，应孟周.羊胎盘的研究进展及其开发应用.吉林农业.2014年，第3期：60

徐桂花.羊胎盘全粉的开发与研究.甘肃畜牧兽医，2000（3）：16-17

陆晖，闫晓梅，张双全.羊胎盘活细胞素微量元素和氨基酸组成的分析.南京师大学报（自然科学版）2001 年第 24 卷第 1 期：79-82

李玉庆 张小平 程爱国.精氨酸的免疫调理作用.中国煤炭工业医学杂志 2007年2月第 1O卷第 2期：121-122

赵保路，张标.专利号：CN201611034280.3. 2017年2月22号：1-7

段文杰.枸杞子的药理作用及价值. 黑龙江医药.2013年，26（6）：127-128

宋宪铭 ，贾 宁。枸杞多糖对小鼠免疫功能响的研究。甘肃奇牧兽医 2011年 6（总 221）期：5-7

8.蒋万志 ，张洪泉.枸杞多糖在免疫和抗衰老方面的研究进展. 中国野生植 第 29卷第 2期2010年 4月：5-7

9..孙秀川.维生素 C 对机体免疫功能的影响.内蒙古医学杂志.2014年，46（2）：174-176

10.维生素C对小鼠免疫功能的影响.右江名族医学院学报.1990年3月，12（1）：1-3