碳青霉烯类耐药大肠埃希菌耐药基因型检测及同源性分析

胡志军，吴希静，潘晓龙，崇慧峰，朱娟娟，赵哲，唐吉斌

作者单位：铜陵市人民医院，a检验科，b妇产科，安徽 铜陵244000

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌（Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae，CRE）在我国临床上越来越常见，美国疾病控制和预防中心（CDC）已经将CRE定义为对全球公众健康构成严重威胁三种微生物之一[1]，但碳青霉烯类耐药大肠埃希菌分离率相对稳定，一直维持在2%左右[2-3]。大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制在各地区均见到不同报道。因此，笔者检测临床分离的碳青霉烯类耐药大肠埃希菌所携带的碳青霉烯酶耐药基因型，并对其进行同源性分析，为医院感染和临床提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料 25株碳青霉烯类耐药大肠埃希菌分离自2012年9月至2016年10月铜陵市人民医院临床标本，剔除同一病人重复菌株。抗菌药物纸片和培养基分别为英国OXOID公司和合肥天达公司产品。

1.2 方法

1.2.1 细菌培养鉴定和药敏试验 严格按照操作规程进行，梅里埃公司Vitek-2 Compact型细菌鉴定仪进行细菌鉴定。采用纸片扩散法进行药敏试验，依据CLSI 2015年[4]标准判断结果。质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922。

1.2.2 EDTA双纸片协同试验 将培养过夜的细菌制成0.5麦氏浓度菌液，接种MH平板，晾干后中间贴IPM，相距1～2 cm处贴EDTA纸片（含4 μL 0.5 M EDTA）。培养18～24 h后，以IPM抑菌圈在EDTA纸片侧明显扩大者为金属酶阳性。

1.2.3 改良Hodge试验 参照CLSI 2015推荐方法进行。

1.2.4 碳青霉烯酶基因检测 （1）PCR试剂与仪器：PCR试剂盒、琼脂糖（进口分装）、DNA Marker、电泳缓冲液等试剂为上海生工产品。扩增用瑞士罗氏cobas z 480型PCR仪进行。（2）PCR方法：煮沸法提取细菌DNA模板，实验严格按照试剂盒说明书操作。……