卵黄抗体提取方法的优化

张曼，柳溪，丛日华，通信作者

卵黄抗体提取方法的优化

张曼1，柳溪2，丛日华2，通信作者

（1. 杨凌职业技术学院，陕西 杨凌 712100；2. 西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌 712100）

近年来，卵黄抗体因不发生交叉反应且特异性强等优点成为了免疫学研究的热点，研究表明，动物经口服用从蛋黄中分离的IgY可以预防或治愈消化系统及呼吸系统相关疾病，但缺乏适用于大批量生产的工业化工艺。现有的纯化方法主要有：沉淀法、层析法与超滤法，3种方法各有优缺点，其中沉淀法是目前最有潜力用于量化生产的方法，但存在效价和得率不能兼顾的缺点。本试验选用经灭活新城疫病毒免疫后的母鸡所产鸡蛋分离得到的卵黄原液，经聚乙二醇浓度梯度提取后测试，结果显示质量浓度为3.5%、8.0%和12.0%时连续纯化效果最佳。此外，经物理分离法分离蛋黄与蛋清，所得卵黄原液中蛋清的残余量几乎为零，消除了蛋清中的蛋白质与脂质对纯化的影响。经过物理分离及3次连续纯化获得的卵黄抗体经BCA试验和SDS-PAGE检测显示，抗体纯度可达80%左右，采用血凝抑制试验进行抗体效价检测，平均滴度可达213。经试验证明，用缓冲液透析后，IgY提取物可以在-20 ℃下储存超过一年。该优化的提纯方法既保证了效价，又保证了产量，且试验流程简洁、成本低廉，为卵黄抗体纯化工业化生产提供参考。

卵黄抗体；蛋白质纯化；聚乙二醇；新城疫病毒；血凝试验与血凝抑制试验

IgY作为一种廉价的多克隆抗体，已有多个报道表明IgY是治疗胃癌[1]、囊性纤维化疾病[2]以及龋齿[3]的一种新方法，并且在预防疾病上也有良好效果[4-7]。……