灵芝中三萜类有效成分的提取技术

任奕

摘要：以灵芝三萜类成分的提取工艺研究成果为基础，介绍溶剂提取、超声波提取、酶解提取等传统提取方法，以及高压超临界CO2提取、高压脉冲电场提取等现代提取方法的研究进展，为进一步开展灵芝相关研究提供参考。

关键词：灵芝;三萜类成分;提取工艺;提取率

灵芝（Ganoderma Lucidum Karst）是孔菌科真菌灵芝的子实体，为我国传统的药食兼用的大型真菌，其孢子、菌丝和子实体均可利用，具有祛病延年、滋补强壮的作用。灵芝三萜化合物是从灵芝中分离出来的一类具有生物活性的成分，具有较强的生理活性，能够增强免疫力、延缓衰老、抗肿瘤、抗病毒、降低胆固醇等。为有效提取灵芝中的三萜类成分，诸多学者对相关提取工艺进行研究和优化，旨在为灵芝三萜类成分的开发利用提供数据支持和试验基础。

1 灵芝三萜类成分的提取技术

1.1 溶剂提取法

溶剂提取法包括乙醇热提、乙醇回流提取、冷凝回流提取和索氏提取等。其中乙醇回流提取法较为常用。

李康等为确定破壁灵芝孢子粉中总三萜的最佳提取工艺，并对其体外抗肿瘤活性进行评价。最佳提取工艺条件为：95%乙醇，液料比60∶1，在85 ℃条件下回流提取2 h，提取2次，总三萜的含量可达6.45%。

段晓颖等优选灵芝总三萜最佳提取与精制工艺参数时，以灵芝总三萜、灵芝酸A为考察指标，通过均匀设计确定总三萜提取最佳工艺参数。灵芝总三萜提取工艺为8倍量，用900 mL/L乙醇提取3次，每次100 min，提取率达88.39%。

1.2 超声辅助提取法

超声波辅助提取是利用超声波的空化作用、机械作用和热效应等加速细胞内有效物质的释放、扩散和溶解，不仅提取率高，而且能够避免高温对有效成分的影响。

王石磊等选取云南文山产的竹灵芝作为研究对象，考察乙醇浓度、温度、料液比、提取时间等不同提取条件对灵芝中三萜类成分提取得率的影响，再利用正交试验法优化提取条件，最终确定最佳提取条件为：乙醇浓度100%，料液比1∶20，浸提温度40 ℃，提取时间20 min，提取得率达1.8%。

1.3 酶辅助提取法

酶解法提取灵芝三萜类成分时，主要是利用酶解使灵芝结构变得松散，降低与原料的结合力，从而使三萜类成分浸出。

丁霄霄等以灵芝子实体为原料，在酶解时间、酶解温度和酶解pH单因素试验的基础上，利用响应面法优化复合酶酶（纤维素酶、半纤维素酶、木瓜蛋白酶）提取灵芝总三萜的工艺条件。酶解处理时间、温度和pH分别为90 min、50 ℃和5，酶解处理后的原料用无水乙醇在80 ℃水浴回流提取2 h，提取得率为1.29%±0.04%，与理论预测值1.28%接近。复合酶提取方法简单、效率高，可用于提取灵芝总三萜。

刘晓艳等利用响应面法对灵芝总三萜的提取工艺进行优化，同时对其抗氧化活性进行研究。在单因素酶解时间、酶解pH、酶解温度和酶用量的基础上，以纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶的用量为自变量，以灵芝总三萜得率为响应值进行响应面试验设计，得到最优提取条件为：酶解时间80 min、提取pH 5、酶解温度50℃、纤维素酶∶果胶酶∶中性蛋白酶为2.11∶0.86∶2.09，该条件下的预测值1.02%、实际值为0.99%，相对误差2.9%。在抗氧化试验中，灵芝提取液对DPPH自由基和羟基自由基有一定的清除能力，且具有较好的还原能力。

1.4 微波-超声波协同提取法

微波-超声波协同提取法充分利用微波的高能作用和超声波振动的空穴作用，克服常规微波提取和超声波提取的不足。

梁磊等探索微波-超声波协同提取对灵芝三萜的提取工艺及提取产物的抗氧化活性时，在单因素试验的基础上，选择微波功率、超声波功率、乙醇浓度和提取时间4个因素，通过响应面分析进行工艺优化。结果显示，在乙醇含量75%、微波功率650 W、超声波功率730 W、提取时间20 min的条件下，灵芝三萜的提取率达13.18 mg/g，其中灵芝酸A含量为2.5 mg/g。

1.5 高压超临界CO2提取法

高压超临界CO2提取法是指提高超临界CO2提取压力，通过增加超临界CO2介质的密度和溶解能力，从灵芝细粉中提取出更多的灵芝三萜成分。

华正根等采用不同高压的超临界CO2提取法提取灵芝细粉中的灵芝三萜和甾醇成分，通过高效液相色谱（HPLC）测定灵芝三萜和甾醇的含量，并与传统的乙醇回流提取法进行比较。研究表明，当提取压力85 MPa、提取温度50 ℃、提取時间4 h时，灵芝三萜含量为1.35%，麦角甾醇含量为0.32%，分别比传统乙醇回流提取法提高46.7%和60%。HPLC图谱表明，高压超临界CO2提取法的三萜和甾醇含量高、成分种类多。

1.6 亚临界水提取法

亚临界水提取技术是在一定压力下，将水加热到100 ℃以上临界温度374 ℃以下，通过调节温度控制水的介电常数，从而改变水的极性。此法具有提取时间短、提高率高、能耗低、绿色无毒、后续分离纯化方便等优点。

徐瑞聆设计单因素试验，考察提取温度、时间、液料比、提取次数对灵芝酸类成分提取的影响。优化的灵芝酸亚临界水提取工艺为：液料比为11，于140 ℃、5 MPa条件下提取5 min。亚临界水提取法与索氏提取法的提取量相当，较超声提取法高，但耗时更短，且不需要有机溶剂，有利于保护环境。

1.7 高压脉冲电场辅助提取法

刘俊丽等利用高压脉冲电场对灵芝孢子粉进行破壁试验，以期提高其破壁率。结果表明：对灵芝孢子粉破壁率的影响大小依次为电场强度>脉冲个数>脉冲宽度。最优工艺参数为：电场强度25 kV/cm、脉冲宽度80 μs、脉冲个数4万个，破壁率可达66.74%±0.03%，多糖和总三萜溶出量分别达到（0.99±0.11）g/100 g和（1.79±0.03） g/100 g。

2 结语

灵芝中三萜类成分的提取方法有溶剂提取法、超声波提取法、酶解提取法、亚临界水提取法、高压超临界CO2提取法、高压脉冲电场提取法等。这些提取方法各具优点和缺点，其中溶剂提取法收率较低，生产周期较长;超声波提取、高压超临界CO2提取等现代提取法的效率和提取物纯度高，生产周期短，操作简单。开展灵芝三萜类成分提取工艺研究，对灵芝资源的进一步开发利用具有重要意义。

参考文献

[1] 段晓颖，范梨颖，马秋莹，等.灵芝总三萜提取与精制工艺优选[J].中医研究，2018，31（11）：59-63.

[2] 王石磊，雷文波，姚丽文，等.云南竹灵芝中三萜类成分的提取工艺优化[J].山东化工，2018，47（24）：13-15.

[3] 丁霄霄，李凤伟，余晓红.响应面法优化复合酶提取灵芝总三萜工艺[J].食品工业，2018，39（8）：40-44.

[4] 华正根，王金亮，朱丽萍，等.高压超临界CO2提取灵芝三萜和甾醇成分的研究[J].中国食用菌，2018，37（5）：62-65.

[5] 徐瑞聆，郭思扬，王雅文，等.亚临界水提取灵芝子实体中灵芝酸类成分的工艺优化[J].华西药学杂志，2019，34（4）：393-395.