高通量自动化磁珠提取血凝块DNA的方法研究

潘亭亭 汪伟伟 吉栩

临床检验中血清样本使用后剩余的血凝块可以作为重要的样本资源重新回收、提取DNA进行利用，作为生物样本进行保存[1]，或者用来进行疾病诊断[2]或基因多态性和功能研究[3-5]。血凝块DNA提取的方法通常可以分为两个阶段：第一阶段通常是血凝块的匀浆或破碎，常见的方法包括使用手动或电动匀浆器、尼龙网挤压、剪刀剪碎、研磨棒研磨、加入钢珠搅拌等方式[6-8]，使血凝块从一整块分散成为悬浊液或者是尽可能小的小块；第二个阶段则是将分散后的血凝块样本采用不同的方法进行DNA提取，通常是各种血液DNA的提取方法或者是试剂盒，包括使用如酚/氯仿、高盐沉淀、各种商业化血液提取试剂盒等[6，9-11]。血凝块的匀浆、破碎可以增加样本与消化、裂解试剂的接触面积，有利于DNA释放。但是文献所述方法中的手工和匀浆设备等操作[2，6-7]，需要消耗大量的时间和人力，难以高通量同时处理大量样本，并且需要额外准备器械、适配的耗材等。或者是使用更复杂的试剂处理，试剂体积较大不适合常规自动化提取设备的要求[6-7]。为了实现自动化提取血凝块DNA，本研究采取流程简化、效率兼顾的思路，通过对适当大小的血凝块调整蛋白酶K用量、消化处理的温度和时间，结合常规血液DNA自动化提取使用的磁珠提取方式，建立高通量自动化的血凝块DNA提取方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 材料和试剂 血凝块来源于生化检验后剩余的血凝块，采集时间为检验结束后1～2天，将血凝块冻存在-80℃备用。……