自噬在硼替佐米诱导的肾癌细胞凋亡中作用的研究

陈福东，肖 帅，张鸿雁，毕林涛

(吉林大学中日联谊医院 1.手术室；2.核医学科；3.肿瘤血液科，吉林 长春130033)

据统计资料显示，我国肾癌发病率呈逐年上升趋势，至2008年已跃居我国男性恶性肿瘤发病率第10位[1]。肾癌的传统治疗方法效果并不理想。有文献表明[2]，基于肾细胞癌的分子水平的治疗策略显示出潜在的优势。近来的研究表明，自噬在抗肿瘤药物引起的细胞凋亡中发挥重要的作用[3]。本研究利用体外培养人肾癌ACHN细胞，探讨自噬在硼替佐米诱导的肾癌细胞凋亡中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

人肾癌ACHN细胞系购于中国科学院上海生命科学研究院；G250考马斯亮蓝、十二烷基硫酸钠(SDS)、三羟甲基胺基甲烷(Tris-Base)与四甲基二乙胺(TEMED)购于美国Sigma公司；HEPES缓冲液、L-谷氨酰胺购于美国Amresco公司；标准胎牛血清(FBS)购于江苏晶美生物科技有限公司；Caspase-3、LC3购于Santa Cruz公司；胰蛋白酶、辣根过氧化物酶羊抗鼠二抗购于北京鼎国生物技术有限公司；噻唑蓝(MTT)购于北京赛驰生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1药物、试剂配置 配置1640完全培养液、D-Hanks液、PBS液、0.25%胰蛋白酶溶液、电泳缓冲液、电泳转移缓冲液、12%分离胶、浓缩胶。

1.2.2细胞培养 a)细胞复苏;b)细胞培养及传代;c)细胞冻存。

1.2.3MTT检测细胞增殖率 酶联免疫检测仪，波长490 nm检测，增殖率=(1-实验组/对照组)×100%。

1.2.4Western blotting 检测硼替佐米对人肾癌ACHN细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及自噬相关蛋白LC3表达水平的影响

1.3 统计学处理

所有数据采用SPSS 16.0软件进行统计学处理，各个样本均数间的统计学差异采用t检验进行分析，采用方差分析比较……