siRNA介导的ADAM17基因沉默对前列癌PC3细胞增殖和凋亡的影响

李 雪，冯树强，李然伟，田文杰，姜 爽，杨 贺

(吉林大学第二医院 泌尿外科，吉林 长春130041)

据流行病学资料统计，前列腺癌(prostate cancer,PCa)是危及男性健康的主要疾病，尤其是西方国家男性发病率最高的恶性肿瘤，死亡率仅次于肺癌[1]。近年来随着人口老龄化到来和高龄人群增多，我国PCa的发病率和死亡率也呈逐年上升趋势[2]。早期肿瘤可以通过外科手术、放射治疗达到临床治愈，但晚期肿瘤则需要采用激素治疗。去势治疗虽然有效，然而绝大多数患者在治疗过程中因转归为雄激素非依赖性而最终需要化疗，但副作用大且疗效差[3]。因此人们开始探索新的分子靶向用药的基因治疗。随者研究的深入，发现ADAM17的异常表达与PCa细胞增殖和侵袭等生物学功能和效应密切相关，在PCa的发生发展和转移的全过程中扮演着极其重要的角色，也发挥着十分关键的作用[4，5]。鉴子RNA干扰技木被普遍认为能从源头上使某些致癌基因“沉默”，从而抑制肿瘤细胞增殖及转移[6]。故我们应用RNA干扰(RNAi)技术，设计针对ADAM17-siRNA表达载体，转染PC3细胞后观察ADAM17在PCa中表达的变化，并探讨其变化对PC3细胞增殖和凋亡的影响，旨在为提高临床PCa的治疗水平提供实验依据和新的思路。

1 材料和方法

1.1 主要材料人前列腺癌PC3细胞株购自ATCC公司， PGCsi-U6/Neo/GFP购于上海吉凯基因化学公司，Trizol试剂为 Gibco公司产品，限制性内切酶和工具酶购于大连 Takara公司，RPMI1640培养基,，小牛血清为Hgclone公司产品，转染试剂 LipofetamineTM2000购于 Invitrogen公司，G418购于 Sigma公司，ADAM17定量检测试剂盒购于晶美公司，流式细胞仪(FCM)购自美国Clomech公司， 噻唑蓝(MTT)购自上海吉凯基因化学公司，原位未端标记(TUNEL)细胞凋亡检测试剂盒购自北京中山生物公司。……