靶向血管内皮生长因子受体2的sKDR抑制血管内皮细胞生长和血管生成的研究

郑红淑，王秀岩，李然伟，冯树强，李春艳，徐文翠

(吉林大学第二医院 泌尿外科，吉林 长春130041)

恶性肿瘤的生长、侵袭和转移与新生血管形成密切相关，血管形成在肿瘤多个生物学过程中均起到至关重要的作用[1]。近年来抗血管生成是治疗肿瘤的研究热点之一，已被许多研究证明是有效的，已成为癌症治疗不可替代的方法。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是血管生成最重要的因子，可通过不同形式的干预，以阻断肿瘤新生血管形成。抑制肿瘤血管生成的策略包括抑制血管生成因子及其受体的产生，抑制VEGF信号通路，抑制VEGF与其受体之间的结合，抑制VEGF信号的细胞内转导。VEGF促肿瘤生长和血管形成作用主要与其受体KDR(kinase insert domain receptor，KDR)有关[3]。KDR是一种跨膜蛋白，在正常组织中不表达，但在多种实体肿瘤组织细胞及肿瘤血管内皮细胞均有高表达[4,5]。我们构建了含有KDR胞外VEGF结合区编码基因和信号肽的真核分泌型表达质粒PQE40-KDR，即可溶性血管内皮生长因子受体sKDR(soluble KDR，sKDR)，通过阳离子及脂质体将其转染到人脐静脉内皮细胞HUVEC(Human umbilial vein endothelial cell,HUVEC),观察其对细胞增殖和血管生成的影响，为寻求更加确实有效的分子靶向用药的基因治疗临床恶性实体肿瘤的新靶点提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 一般材料小鼠抗His标签单克隆抗体和TA克隆载体pMD19-T Simple Vector购自Qiagen公司；IPTG购自Promega公司；各种限制性内切酶、工具酶及DNA片段回收试剂盒和表达载体pQE40购自TaKaRa公司；NTA-Ni2+琼脂糖树脂购自Qiagen公司；重组人VEGF和rhVEGF165购自Peprotech公司；RPMI-1640培养基、小牛血清购自Hyclone公司；TRIzoL试剂购自Gibco公司；……