转基因玉米2A-5特异性PCR方法的建立

武文艳, 刘新香, 周秒依, 刘金香, 刘亚

北京市农林科学院玉米研究中心, 玉米DNA指纹及分子育种北京市重点实验室, 北京 100097

根据国际农业生物技术应用服务组织(The International Service for the Acquisition of Agri-Biotech Applications，ISAAA)统计，2018年种植或进口转基因作物的国家和地区共计70个，全球转基因作物种植面积达到1.9亿hm2。自1996年以来，转基因作物种植面积累计达25亿hm2，约增加了113倍，堪称全球普及速度最快的作物技术[1]。玉米是用途最为广泛的粮食作物，同时也是全球种植范围最广、产量最大的谷类作物，2018年全球转基因作物种植面积的30.7%为转基因玉米，转基因玉米种植面积高达到5 890万hm2，从全球单一作物的种植面积看，2018年转基因玉米的应用率为30%[1]。

随着各国对转基因产品阈值管理和标识制度的相继建立实施，对转基因产品进行定量检测成为必然趋势，越来越多的检测技术被应用于转基因产品的定量检测。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术因其实时、快速、高效和准确定量的优点，已经广泛被应用于转基因产品定量检测[2]。目前已经商业化的转基因玉米品种NK603、MON88017、MIR162等均已建立了品系特异定量PCR检测方法[3-5]。微滴式数字PCR(ddPCR)技术是一种对核酸分子进行绝对定量的方法，该方法在传统PCR扩增前对样品进行微滴化处理，每个微滴不含或含有一个至数个待检测的核酸靶分子，在PCR扩增后，对每个微滴逐个进行检测，根据泊松分布原理，计算出核酸靶分子的起始拷贝数或浓度，从而实现绝对定量的目的。相比于实时荧光PCR，数字PCR具有更好的测量独立性，且数字PCR无需任何校准物，具有更高的稳定性、特异性、灵敏度和精确性等优点[6]。……