铁皮石斛的树栽技术要点及主要成分含量的研究

金昌盛，周卸才，冯敬骞，李姜言，程萱

（1.衢州市衢江区农业特色产业发展中心，浙江 衢州 324000；2.浙江仙霞湖健康科技有限公司，浙江 衢州 324000； 3.衢州职业技术学院，浙江 衢州 324000；4.衢州中医医院，浙江 衢州 324000）

铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥茎，因其富含单糖、多糖、多酚、生物碱等成分，具有抗衰老、抗肿瘤、降血糖、增强机体免疫力、减轻肝损伤等作用，广受市场欢迎。铁皮石斛也是《中国药典》收录的名贵中草药之一，具有滋阴清热、益胃生津等功效，也是养生保健的佳品。

铁皮石斛的自然繁殖率很低，加上长年无节制的采挖，野生资源逐渐枯竭。我国从1980年以来，在多地开展了铁皮石斛人工规模化种植的研究，并从2008年后，种植规模迅速扩大，但主要以大棚地栽方式种植为主，这种模式虽然长势好、产量高、便于管理，但在品质和药效上要比野生的铁皮石斛差。所以近年来，逐步兴起仿野生种植技术，仿野生种植主要采用贴树种植的方式，也有采用岩石种植的方式，理论上后者更接近野生铁皮石斛的生长环境，但对自然条件要求极高，为了能起到示范作用、便于后期大面积推广。

1 铁皮石斛仿野生种植母树筛选研究

衢州地区大部分树种都能作为铁皮石斛的附生母树，考虑到附生母树的郁闭度、树皮的粗糙程度、粗糙树皮的裂纹特征、树皮水分等因素会对铁皮石斛的生长、品质产生影响。经过初步筛选确定板栗树、松树和苦槠树为试验树种。试验时，将已驯化的铁皮石斛组培苗绑在树干上，并抹上泥浆或牛粪，再以青苔等材料覆盖根部。试验结果显示，板栗树作为铁皮石斛附生母树，铁皮石斛组培苗的成活率最高超过97.5%；而松树最低，存活率仅为88.9%，苦槠树栽的成活率为90.8%。因为板栗树树皮粗糙，还有纵裂沟和苔藓，保水性好，树冠为伞形，横向分枝较多，树叶茂密而均匀，郁闭度较大，为铁皮石斛生长创造了良好生境。松树木树皮光滑，保水性差，而且冠幅小，郁闭度低。因此，选择板栗树作为主要的附生母树。同时对母树的树龄进行比较，发现5年～15年的板栗树的树皮粗糙度、水分含量比较适中，树栽铁皮石斛的生长情况良好，品质优异；而15年以上的老树，因其树皮粗糙较干燥，且郁闭度过大，铁皮石斛的生长也会受限[1-2]。

2 铁皮石斛组培苗的驯化研究

因铁皮石斛的自然繁殖率低，目前多采用组培苗驯化，影响组培苗驯化成功的因素包括驯化季节、炼苗时间、开瓶晾置时间、培养基质、定植方式等。课题组通过试验选出组培苗驯化的优化条件，结果表明，初夏和秋季的成活率较高，尤其是初夏成活率超过96%。分析原因主要是冬季气温偏低，组培苗生长缓慢甚至停滞，而盛夏高温高湿，驯化苗的质量也较差，初夏时的气温、湿度最适宜组培苗驯化。炼苗时间应大于30d，因为时间太短，组培苗对外界环境的适应性还较弱，成活率偏低。开瓶后可以让铁皮石斛组培苗适应外界自然环境，但同时也会感染霉菌，所以掌握开瓶时间非常重要，经试验开瓶晾置2～3d培养基无霉菌感染，比较合适。移栽前要将培养基洗掉，以免移栽后滋生霉菌，造成烂根。洗苗的同时，需根据苗高、茎粗度进行质量分级。采用锯末、水苔、泥炭等作为驯化基质，经过试验筛选，以水苔：泥炭：锯末=2：1：1的比例配制的基质移栽 60d成活率均高于96%。但其中的锯末须经过堆沤发酵处理，泥炭使用前也要经过高温消毒。组培苗采用穴盘定植方式，其成活率超过97%。

3 铁皮石斛附生母树绑定技术优化

在将铁皮石斛苗树栽绑定时，要求绑扎物能自然腐烂，从而使得铁皮石斛经过一段时间生长会自然的附着在树干上，这样才不影响后续生长，故绑扎物选择易腐烂的麻绳。绑定时，先挖掉母树栽苗点处的苔藓，再把苗的根基部贴在栽苗点上，然后用麻绳绑紧，要求根系尽量舒展。固定点应在苗根部与根茎基部以上2cm处，不能直接绑在苗基部，以免影响基部发芽和新根生长。为了促进发芽和新根生长可在根基部涂上泥浆或牛粪[1-2]。

4 铁皮石斛不同附生母树对主要成分含量的影响

经过上述栽培方法，分别采集了不同附生母树的铁皮石斛样品，从性状等方面进行了初步的分析，经鉴定为兰科植物铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥茎，不做螺旋处理，为直条，作为含量测定所需的铁皮石斛样本[3]。

4.1 多糖的含量测定

取本品粉末（过三号筛）约0.3g，精密称定，加水200mL，加热回流2小时，放冷，转移至250mL量瓶中，用少量蒸馏水分3次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL，置15mL离心管中，精密加入无水乙醇10mL，摇匀，冷藏1小时，取出，4000r/m离心20分钟，弃去上清液，沉淀加80%乙醇洗涤2次，每次8ml，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液1mL，置10mL具塞试管中，精密加入5%苯酚溶液1mL（临用配制），摇匀，再精密加硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在488nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，按标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算，即得含量结果，见表1。

4.2 甘露糖的测定

取本品粉末（过三号筛）约0.12g，精密称定，置索氏提取器中，加80%乙醇适量，加热回流提取4小时，弃去乙醇液，药渣挥干乙醇，滤纸筒拆开置于烧杯中，加水100mL，再精密加入内标溶液2mL，煎煮1小时并时时搅拌，放冷，加水补至约100mL，混匀，离心，吸取上清液1mL，置安瓿瓶或顶空瓶中，加3.0mol/L的盐酸溶液0.5mL，封口，混匀，110℃水解1小时，放冷，用3.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至中性，吸取400μl，照校正因子测定方法，自“加0.5mol/L的PMP甲醇溶液”起，依法操作，取上清液注入液相色谱仪，测定，即得含量结果，见表1。

4.3 醇溶性浸出物的含量测定

取供试样品粉末2.000g放入蒸馏瓶中，加入100mL 95%乙醇溶液浸提1h，称取蒸馏瓶质量并记录，在沸水浴中回流提取1h，取出冷却，称取蒸馏瓶质量加水补至与m1一致，过滤。吸取滤液20mL于烘至恒重且已知质量的蒸发皿中，于沸水浴上蒸干，转移至烘箱中105℃烘3h，取出至干燥器中冷却称重，即得含量结果，见表1。

4.4 多酚的含量测定

称取0.2g均匀磨碎的试样于10mL离心管中，加入在70℃中预热过的70%甲醇溶液5mL，用玻璃棒充分搅拌均匀湿润，立即移入70℃水浴中，浸提10min（隔5min搅拌1次），浸提后冷却至室温，转入离心机在3500r·min-1转速下离心10min，将上清液转移至10mL容量瓶。残渣再用5mL70%甲醇溶液提取1次，重复以上操作。合并提取液定容至10mL，摇匀。再移取1.0mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待测。在每个试管内分别加入5.0mL的福林酚试剂，摇匀。反应3～8min，加入7.5%碳酸钠溶液4.0mL，加水定容至刻度，摇匀。室温下放置60min，在765nm波长条件下用分光光度计测定吸光度。根据标准曲线计算出茶多酚的浓度，即得含量结果，见表1。

表1 树栽铁皮石斛主要成分含量的结果

5 结语

综上所述，以铁皮石斛不同附生母树的树栽工艺入手，对其栽培技术要点展开深入的探究和分析，并对主要成分含量进行测定，从含量测定结果看，板栗树作为附生母树所树栽的铁皮石斛主要成分较高，较适合作为铁皮石斛优良的附生母树，适合在山区大力推广，整体推动铁皮石斛仿野生栽培产业的发展。