猪CR1-like蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定

贾瑞璞 ， 凌小雅 ， 孙雨晨 ， 尹 伟 ， 范阔海 ， 孙 娜 ， 孙耀贵 ， 李宏全

(山西农业大学动物科技学院 ， 山西 太谷 030801)

以补体受体Ⅰ型(Complement receptor 1，CR1)为基础的红细胞免疫粘附是人红细胞最重要的免疫功能。非人灵长类动物的红细胞免疫粘附受体是一种分子量相对较小的蛋白，称作CR1-like。兽医学研究发现，许多禽类[1～2]、啮齿类[3]、灵长类[4]等动物疾病过程中都存在红细胞免疫功能的变化。1983年，以狒狒和恒河猴作为研究对象，证实了灵长类动物的红细胞可以在体内循环中拦截补体固定的免疫复合物(Immune complex，IC)，粘附着IC的红细胞将其运送至肝脏并返回至循环系统中，这种红细胞-IC的清除机制在IC沉积介导的疾病中是至关重要的[5]。本实验室前期研究工作证实，猪红细胞也具有免疫粘附功能，猪红细胞CR1-like可粘附血清致敏的荧光大肠杆菌，并通过免疫沉淀技术进一步对猪红细胞膜总蛋白分析发现，CR1-like是猪红细胞发挥免疫粘附功能的分子基础[6-8]。

但总体而言，猪的红细胞虽然具有免疫功能，但是猪红细胞发挥免疫粘附功能的分子基础及其结构特征尚不清楚，猪红细胞转移递呈IC的机制研究近乎空白，为了深入研究猪红细胞免疫粘附的分子学基础，本试验构建了CR1-like基因的酵母双杂交诱饵载体，并且对诱饵质粒进行了自激活和毒性检测，为利用酵母双杂交技术进一步研究CR1-like发挥免疫粘附功能的分子机理奠定基础。

1 材料

1.1 菌株、质粒及主要试剂 酵母菌株Y2HGold、诱饵载体pGBKT7、酵母培养基、X-α-Gal、金担子素(Aureobasidia A，Aba)、Yeast Marker Yeast Transformation system 2、Yeast Protein Extraction Reagent酵母总蛋白提取试剂盒，均购自TaKaRa公司；……