下调miR-153-3p可促进Nrf2表达从而减轻H2O2诱导的H9C2细胞损伤*

黄兆琦， 许 卫， 黄炯华， 卢 雄△

（1广州医科大学附属第三医院心内科，广东广州510150；2广州市花都区人民医院心内科，广东广州510800）

心血管疾病是全球范围内人类死亡的首要原因［1］。急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是一种严重的心脏缺血性疾病，治疗过程中可发生心肌缺血再灌注损伤［2］，后者是指心肌缺血缺氧后再恢复血液灌流，引起心肌损伤进一步加剧的过程［3］。目前研究表明，再灌注后大量活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）的生成是氧化损伤以及心肌细胞凋亡的主要原因之一［4］。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一种单链非编码RNA，其可通过与目标基因3'端非翻译区（3'-untranslated region，3'-UTR）结合，在转录后水平调控基因表达［5］。当前研究表明，miRNA 在缺血再灌注损伤中具有重要作用［6］。在缺血再灌注损伤中，心肌组织中 miR-499 和 miR-328 表达明显升高［7-8］。有研究报道，miR-153-3p 高表达可改善肝细胞氧化应激损伤［9］，而其在心肌细胞氧化损伤中的作用却少见报道。

本研究将通过H2O2诱导H9C2 细胞发生氧化应激损伤，通过MTT 实验和RT-qPCR 检测氧化应激状态下H9C2 细胞的活力和miR-153-3p 表达的变化。随后观察敲减miR-153-3p表达对H2O2诱导的H9C2细胞损伤的影响，并通过双萤光素酶报告基因实验检测miR-153-3p的作用靶点。

材 料 和 方 法

1 试剂

K1622 逆转录试剂盒购自Fermentas；SYBR®Premix Ex Taq™ II 购自 TaKaRa；RNeasy 试剂盒和Taq PCR Master Mix 购自 Qiagen；RIPA 裂解液购自Solarbio；BCA 试剂盒购自 Thermo；MTT 溶液购自Amresco；miR-153-3p mimic、miR-153-3p inhibitor、miR-153-3p 阴性对照（negative control，NC）、NFE2L2质粒和NFE2L2-3′-UTR突变质粒由上海吉玛公司合成；Lipofectamine 2000 购自Invitrogen；丙二醛（malondialdehyde，MDA）比色试剂盒（TBA 法）、总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）比色试剂盒（NBT 法）和Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天公司；核因子E2 相关因子2（nuclear factor E2-related factor 2，Nrf2）转录因子检测试剂盒购自武汉艾美捷公司；……