高效价猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白多克隆抗体的制备及应用

张文 刘照贞 李俊硕 商营利

（山东农业大学动物科技学院 山东省动物生物工程与疫病防治重点实验室，泰安 271018）

猪圆环病毒II型（Porcine circovirus 2，PCV2）感染引起的猪圆环病毒相关疾病（PCV2-associated diseases，PCVD）是严重危害养猪业的重要传染病之一。当前，我国猪群中PCV2的感染率高、流行范围广，死亡率可达10%以上，给养猪业造成重大的经济损失［1］。虽然已有多种疫苗免疫防控，但由于对PCV2的致病机制尚不完全清楚以及病毒的持续变异，临床上仍难以控制该病毒的感染。目前已发现 PCV2有 5个基因型（PCV2a-e）［2］，其中 PCV2a，PCV2b和 PCV2d流 行 率 较 高［3］， 而PCV2b是近年来国内流行毒株的主要优势基因型［4］。PCV2b基因组全长约1.7 kb，包含11个开放阅读框（ORF1-11）［5］，其中ORF2编码的结构性蛋白Cap包含了病毒的主要抗原决定簇，与宿主的免疫相关，具有良好的免疫原性和反应原性，且与PCV1 Cap蛋白无抗原交叉反应［6］。因此，Cap蛋白是流行病学诊断和疫苗研究的关键蛋白，同时也是制备抗PCV2抗体的理想抗原［7］。

已有多项研究通过原核或真核表达系统表达了全长或截短形式的PCV2 Cap蛋白，并制备了抗Cap的单克隆或多克隆抗体，但受到Cap表达量低，或不能实现可溶性表达以及制备成本高等诸多因素影响，制备的抗体存在效价较低或应用范围窄等局限［8-12］。因此，制备高效价、应用广的抗PCV2b Cap抗体对于PCV2b的临床诊断和科学研究均具有重要意义。本研究通过优化表达条件，利用大肠杆菌表达了不含核定位信号肽的PCV2b Cap截短蛋白，实现了大量可溶性表达，并将纯化的重组Cap蛋白免疫实验兔，制备了高效价抗PCV2b Cap的多克隆抗体。……