广西猪圆环病毒2型全基因扩增及来源分析

薛新绵

摘要：某猪场发生疫情，通过聚合酶链反应（PCR）检测、扩增猪圆环病毒2型（PCV2）GX-20全基因序列，通过与国内外毒株同源性比对、绘制系统发育进化树，发现GX-20与广东、湖南、贵州和山东等周边省份同源性较高，且高于历年分离的广西流行毒株，结合引种情况，推测GX-20是由于引种从广东传播到广西。

关键词：猪圆环病毒2型;全基因扩增;来源

中图分类号：$852.65⁺1 文献标识码：B文章编号：2095-9737（2020）06-0008-02

猪圆环病毒2型（poreine circovirus type 2，PCV2）是猪圆环病毒相关疾病（PCV2-associateddiseases，PCVAD）的主要病原，该病是严重危害全球养猪业的猪场重要传染病，每年给我国造成巨大经济损失。PCV2是无囊膜的单股环状负链DNA病毒，全长约1800bp，包含5个开放阅读框，编碼Rep、Rep、Cap等蛋白。根据病毒全基因组和Cap基因，可将PCV2分为8个基因型，其中PCV2a、PCV2b、PCV2d在全球广泛流行。2010年我国检出的PCV2变异毒株属于PCVgd亚型。

作者在发病猪群中检出PCV2，通过扩增其全基因、与国内外毒株进行同源性比对，结合生产实际，推测该病毒来源，为掌握近年来广西PCV2流行和变异、掌握病毒遗传进化以及致病机理的研究提供数据参考。

1材料和方法

1.1材料

pMD18-T载体、大肠杆菌DH5a、LA TaqMix、LB培养基、DNA抽提试剂盒等试剂分别购自Takara公司、生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.2样品采集、抽提及PCV2全基因扩增

发病猪组织样品来源于本地某猪场，采集猪肺脏、淋巴结、脾脏和肝脏。将组织样品与无菌PBS按照1：4混合、研磨制成匀浆，冻融3次后，离心取上清，用于抽提基因组DNA。以基因组DNA为模板，进行PCV2全基因扩增。引物及反应条件（表1）、反应体系参考文献。

1.3DNA片段纯……