肽核酸荧光原位杂交技术检测生肉中沙门氏菌方法的建立及应用

杨 彤，吴 姗，李 可，帅江冰，叶子弘，张晓峰*

（1. 中国计量大学 生命科学学院，浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室，浙江 杭州 310018；2. 浙江省检验检疫科学技术研究院，浙江 杭州 310016）

沙门氏菌（Salmonella）是最常见的食源性致病菌之一，由其在世界各地引起的食物中毒中常居于首位，据2009 年～2014 年美国国家疾病控制和预防中心（CDC）的数据显示，沙门氏菌病的暴发通常与食物来源有关，在484 次疫情中，385 起事故因食源性致病菌传播导致[1]。因此食品中沙门氏菌高效检测方法的建立，有助于在源头控制由沙门氏菌引起的食源性疾病的暴发。目前食品中沙门氏菌的检测方法主要包括分离培养、免疫学方法和分子生物学方法。分离培养法是实验室最常用和最经典的方法，但其自动化程度低、耗时长、步骤繁琐。ELISA、荧光抗体染色法（免疫荧光法）和同位素标记抗体法（放射免疫）等，尽管具有操作简便、快速的特点，但特异性较差，所需耗材价格昂贵，因此目前在国内应用较少。以PCR 技术为代表的分子生物学方法操作简便、灵敏度高，但对检测人员、仪器设备及环境的依赖性高，实验室往往不能杜绝假阴性与假阳性的结果。

肽核酸（Peptide nucleic acids，PNA）是一种人工合成的核酸模拟物，结合荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization，FISH）可用于食品及环境中的致病菌检测。Almeida 等人首先将该方法应用到沙门氏菌的检测，并在粪便和水中检测到了沙门氏菌[2]。在此基础上，为进一步提高探针的特异性，本研究基于沙门氏菌invA 毒力基因，设计特异性PNA 探针Sal-invA，经条件优化，建立快速、准确、灵敏的PNA-FISH 检测方法，为快速检测致病性沙门氏菌提供了一种可行的技术手段。……