组蛋白去乙酰化酶9对肾小球发育的调控

李 知 侯 庆 汪 玲 朱小东 翟修文 秦卫松 曾彩虹 陈朝红 刘志红

肾小球是肾脏的功能单位，肾小球滤过屏障是肾脏血液滤过装置，发育缺陷引起肾功能异常[1]。肾小球滤过屏障由肾小球血管内皮细胞、肾小球脏层上皮细胞即足细胞和基底膜构成[2]，其中，足细胞间的裂孔隔膜是肾小球滤过屏障的独特结构，裂孔隔膜发育障碍会导致蛋白尿的产生[3]。

哺乳动物的肾脏发育经历前肾、中肾和后肾三个阶段，前肾和中肾是哺乳动物胚胎时期的暂时器官，后肾是体内永久性器官[4]。斑马鱼肾脏发育经历前肾和中肾两个阶段，其在结构、功能和分子组成上均与哺乳动物肾脏相似和高度保守[5]。斑马鱼前肾在受精后(hours post-fertilization,hpf)80h即发育成熟，具有正常的肾小球滤过功能[6]；斑马鱼肾小球滤过膜与哺乳动物相同，由足细胞、肾小球血管内皮细胞和基底膜构成[7]。

在斑马鱼前肾发育过程中，肾脏祖细胞原肠期和体节发生期可通过不同转录因子的表达来区分，如pax2a，lhx1a和wt1a；在15体节期，足细胞的祖细胞被wt1b特异性标记，同时还表达pax2a和lhx1a；到24hpf，足细胞开始表达裂孔隔膜分子podocin和nephrin；在48～50 hpf，随着足细胞的发育和血管生成，肾小球开始形成，直至84hpf肾小球发育成熟[8-10]。因此，斑马鱼是研究肾脏发育的理想模型，被广泛应用[11-12]。

本研究前期发现组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9，hdac9)在发育的肾小球中高丰度表达，随着肾小球发育完成其表达消失。本文拟通过基因编辑技术敲除hdac9基因，探究hdac9基因缺失对肾脏发育的影响。

材料与方法

斑马鱼饲养和繁殖野生型斑马鱼(AB品系)购买于国家斑马鱼资源中心。……