miR-219a-5p通过调控NEK6基因表达抑制视网膜母细胞瘤增殖、迁移和侵袭的机制

吴育芝 刘伟仙 林智

(1海口市第三人民医院眼耳鼻咽喉科，海南 海口 571100；2海南医学院第一附属医院眼科)

视网膜母细胞瘤(RB)是原发于视网膜的恶性肿瘤，对患者的视功能造成严重损害，严重时可危及生命〔1〕。由于发病初期，肿瘤体积较小且位于视网膜的周边，难以及时发现，易出现漏诊〔2〕。临床主要采用放疗、化疗、眼球摘除手术等方法进行治疗，虽然治疗方法不断改善，但治疗疗效依然有限〔3〕。微小RNA(miRNA)是一类高度保守的非编码单链小分子RNA，长度为18～25个核苷酸，可通过与靶基因互不结合调控靶基因的表达，在肿瘤的发生、发展中发挥调控作用〔4〕。研究显示，miR-219-5p在胶质母细胞瘤中表达下调，miR-219-5p过表达抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移，其靶向表皮生长因子受体(EGFR)表达调控RTK途径影响胶质瘤细胞的生物学功能〔5〕。miR-219-5p在黑素瘤组织和细胞系中表达显著降低，其低表达的黑素瘤预后较差，上调miR-219-5p表达可能通过靶向Bcl-2抑制黑素瘤细胞的生长和转移，并增强其化学敏感性〔6〕。目前，miR-219-5p在RB中的表达及对其增殖、迁移和侵袭的影响还未见报道。本研究探讨miR-219-5p在RB细胞Y79的表达情况及其对Y79细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1细胞和实验试剂 人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181和人视网膜母细胞瘤细胞系Y79细胞，美国ATCC公司；胎牛血清和RPMI1640培养基，美国Gibco公司；Trizol试剂、PCR试剂盒和LipofectamineTM2000试剂盒，美国Invitrogen公司；逆转录试剂盒，TOYOBO公司；引物序列和质粒载体，广州市复能基因有限公司；二喹啉甲酸(BCA)蛋白测定试剂盒，北京雷根生物技术有限公司；……