siRNA沉默NUMB表达对胆囊癌细胞NOZ和GBC-SD增殖和转移的影响

蔡炜龙 余胜 汪伟民 楼能

胆囊癌是胆道系统中最常见的恶性肿瘤，近年来其发病率呈现升高趋势[1]。胆囊癌早期症状不明显，易与消化道疾病混淆而被忽略，但其进展较快，极易发生局部浸润和远处转移，因此发现时多处于中晚期，患者已失去手术治疗的机会。且胆囊癌对放化疗不敏感，因此预后极差，患者5年生存率低于5%[2-4]，因此亟待寻找胆囊癌早期诊断的靶标。细胞命运决定子NUMB是一种定位于细胞基底层的内吞调配蛋白，参与细胞表面蛋白等的内吞转运过程[5]。研究表明NUMB参与多种肿瘤细胞的增殖、迁移和上皮间质转化（epithelial mesenchymal transitions，EMT）过程，如结肠癌、卵巢癌等[6-7]，而NUMB对胆囊癌细胞的作用目前尚鲜见报道。因此本研究拟通过观察NUMB对胆囊癌NOZ和GBC-SD细胞增殖和迁移的作用，从而探讨其作为胆囊癌早期诊断靶标的可能性。

1 材料和方法

1.1 实验材料 细胞：人胆囊癌细胞NOZ和GBC-SD细胞由上海市胆道疾病研究重点实验室提供。主要试剂：NUMB抗体和兔二抗购自武汉Abclonal有限公司；链霉素-青霉素双抗、达尔伯克改良伊格尔培养液（DMEM）、选择性改良伊格尔培养液（Opti-MEM）、FBS、CCK-8试剂盒、多聚甲醛、结晶紫、BCA蛋白浓度测定试剂盒等购自上海翊圣有限公司。脂质体2000（Lipofectamine2000）购自美国Invitroen公司。si-NUMB和si-NC由上海拓然生物科技有限公司合成。

1.2 细胞培养 NOZ细胞用含10% FBS和1%的链霉素、青霉素的Williams培养基培养，GBC-SD细胞用含10% FBS和1%的链霉素、青霉素的DMEM培养基培养，均放入5% CO2培养箱中37℃恒温培养，取对数生长期细胞进行实验。

1.3 分组与转染 将培养后的人胆囊癌细胞NOZ和GBC-SD细胞分为实验组（si-NUMB组）和对照组（CTRL组），其中 si-NUMB组细胞转染 si-NUMB，CTRL组细胞转染si-NC。……