直接PCR法在猕猴桃溃疡病检测中的建立

李智念 羊炼 刘露

摘 要：通过优化PCR反应体系和反应程序，本文建立了使用猕猴桃枝条为样品，直接检测猕猴桃溃疡病PSA病原菌的方法。该方法跳过了病原菌培养和DNA提取步骤，大大缩短了检测时长，利用微型PCR仪系统，使针对猕猴桃溃疡病的简单、低成本、快速现场检测成为可能。

关键词：猕猴桃溃疡病;检测方法;直接PCR

中图分类号：S436.634文献标识码：A文章编号：1003-5168（2020）20-0139-03

Abstract： By optimizing the PCR reaction system and reaction program， a method for directly detecting the pathogenic bacteria of kiwi fruit ulcer PSA by using kiwi twigs as a sample was established in this paper. The method skips the steps of pathogen culture and DNA extraction， greatly shortens the detection time， and utilizes a micro-PCR system， which makes simple， low-cost and fast on-site detection for kiwi fruit ulcer possible.

Keywords： kiwi fruit ulcer;detection method;direct PCR

近年來，我国猕猴桃种植面积不断增加，细菌性溃疡病快速蔓延[1-2]。在没有特效防治药品的现状下，加强外引苗木的检疫、及早清除园中感染植株是防范溃疡病，避免果园全军覆没的重要手段。植株感病的早期虽然不表现出相应性状，但已经具备传播扩散致病菌的能力，要及早发现已染病植株并不容易。

PCR检测能够高效准确地鉴定出PSA病原菌，但现有的方法一般要首先采样培养病原菌，然后提取培养出的菌落DNA，再进行PCR检测。这样的流程需要专业人员操作，很难应用到猕猴桃园的常规检测。面对基层猕猴桃园主的自主快速检测方法，目前国内还少有报道。本研究通过优化普通PCR的反应体系与程序，跳过病原物培养和DNA提取过程，直接以猕猴桃枝条为样本进行PCR反应;整合现有仪器设备，避开了常规PCR试验对高速离心机、成像系统或荧光定量系统的依赖，建立了一套简单、可靠、准确、快速、低成本的检测方法，旨在为发展出一种基层猕猴桃园主用得起、用得上的猕猴挑溃疡病早期检测技术，为我国猕猴桃栽培的健康发展提供帮助。……